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蠔油生菜新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白表達(dá)BL21(DE3)轉(zhuǎn)接后搖不起來，sds-page無天然蛋白條帶 已有1人參與
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| 在LB培養(yǎng)基中加入kana抗體和挑單克隆小搖的菌，過夜搖菌培養(yǎng)，第二天早上8.30按1：50的濃度接菌，此時(shí)過夜搖的菌od600大約1，要搖到下午3點(diǎn)od600才勉強(qiáng)到0.6左右，加iptg終濃度0.5mM，37℃200rpm誘導(dǎo)4h后菌液變的比未誘導(dǎo)對比組澄清很多，菌液中像沙石狀沉淀，然后直接煮沸跑sds-page什么條帶都沒有，一片空白的，我這個(gè)目的蛋白是一種蛋白酶，文獻(xiàn)中有表達(dá)過，也是用的bl21（de3），應(yīng)該不是有毒蛋白的問題吧 |
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2樓2022-06-08 20:53:32
ymj002
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3樓2022-06-08 20:55:02
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4樓2022-06-08 21:15:23
蠔油生菜
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但是這個(gè)蛋白的表達(dá)我參考了文獻(xiàn)做的，完全相同的蛋白，文獻(xiàn)中沒有看出是毒性蛋白，而且也是采用的相同的宿主菌dl21（de3）表達(dá)出來了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2022-06-08 21:17:38
tangtuoxian
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
蠔油生菜: 金幣+5, ★★★很有幫助 2022-06-09 11:14:26
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從新挑一個(gè)單克隆菌落，過夜搖起來（10ml）。第二天提取質(zhì)粒（用1-5ml，剩下的菌液保存起來），酶切之后，確定存在目的條帶。 如果克隆是對的，用保存起來的菌液過夜搖起來，重復(fù)之前的蛋白表達(dá)步驟。 如果再次出現(xiàn)相同情況，建議用提取的質(zhì)粒重新進(jìn)行轉(zhuǎn)化（仍然用BL21(DE3), 也可以嘗試其他表達(dá)菌株）。重復(fù)上述步驟。。。 |
6樓2022-06-09 10:56:07
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