 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 671 | 回復(fù): 5 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者quejing26將贈(zèng)送您 100 個(gè)金幣 | ||
[求助]
Inverse—PCR 已有1人參與
|
||
|
之前實(shí)驗(yàn)室一直用inversespcr定位外緣插入片段，我們是做植物，最近一個(gè)月，一直做不出來(lái)，跑膠全是空白，酶以及其他試劑幾乎換了個(gè)遍，就是不行，大家有沒(méi)有遇到類似情況，求助！ @wizardfan @biostar2009 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有163人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
首先 這類實(shí)驗(yàn)?zāi)阋欢ㄒ_定不是技術(shù)問(wèn)題， 最好的方法是 你找個(gè)做過(guò)inverse pcr的人帶你做 我以前也是做一個(gè)月做不出來(lái) 后來(lái)發(fā)現(xiàn)是酶壞了（被師弟放在室溫下太久了，變質(zhì)了）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)pcr cycles溫度不太對(duì)（92-55-72）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)跑膠的染料變質(zhì)，染不上去。 最后找個(gè)分子生物學(xué)專家?guī)兔Σ彭樌鉀Q。 你一定要找個(gè)曾經(jīng)成功過(guò)的人帶你，而且要先確認(rèn)你的所有材料都是好的，技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò) 其次 即使技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò)， inverse pcr這個(gè)技術(shù)本身， 也未必可以成功。 這個(gè)純粹看運(yùn)氣， 你定位插入的地方， 如果距離切割（限制性內(nèi)切酶）的地方太遠(yuǎn)， 比如2w個(gè)base pairs（有點(diǎn)夸張的比喻）， 那你肯定pcr不成。 這種情況要做full genome sequence，燒錢是唯一的辦法。 |
2樓2020-07-30 09:21:39
3樓2020-07-30 09:24:22
【答案】應(yīng)助回帖
|
首先 這類實(shí)驗(yàn)?zāi)阋欢ㄒ_定不是技術(shù)問(wèn)題， 最好的方法是 你找個(gè)做過(guò)inverse pcr的人帶你做 我以前也是做一個(gè)月做不出來(lái) 后來(lái)發(fā)現(xiàn)是酶壞了（被師弟放在室溫下太久了，變質(zhì)了）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)pcr cycles溫度不太對(duì)（92-55-72）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)跑膠的染料變質(zhì)，染不上去。 最后找個(gè)分子生物學(xué)專家?guī)兔Σ彭樌鉀Q。 你一定要找個(gè)曾經(jīng)成功過(guò)的人帶你，而且要先確認(rèn)你的所有材料都是好的，技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò) 其次 即使技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò)， inverse pcr這個(gè)技術(shù)本身， 也未必可以成功。 這個(gè)純粹看運(yùn)氣， 你定位插入的地方， 如果距離切割（限制性內(nèi)切酶）的地方太遠(yuǎn)， 比如2w個(gè)base pairs（有點(diǎn)夸張的比喻）， 那你肯定pcr不成。 這種情況要做full genome sequence，燒錢是唯一的辦法。 |
4樓2020-07-30 09:24:53
|
謝謝回答，不是很會(huì)用小木蟲，抱歉才看到，整個(gè)體系之前實(shí)驗(yàn)室做了一年，非常成熟，師兄帶我做的，后來(lái)師兄畢業(yè)了，我們是做很多獨(dú)立樣品，而且是四堿基酶，所以做一次二十多個(gè)樣品，如果成功的話不會(huì)一個(gè)也做不出來(lái)，各種試劑沒(méi)有問(wèn)題，酶和引物都用新的，循環(huán)我也用的55度，我還會(huì)進(jìn)行二次循環(huán)，用58度，最近一直在做，還是不行，有點(diǎn)氣餒了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2020-12-24 22:26:39
十口日月
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 421
- 帖子: 100
- 在線: 40.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 24245149
- 注冊(cè): 2020-10-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2021-10-12 10:52:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 quejing26 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +10 | ounce. 2026-03-04 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +4 | T123 tt 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
[考研] 332材料求調(diào)劑 +6 | zjy101327 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 接收調(diào)劑 +19 | 津萌津萌 2026-03-02 | 29/1450 |
|
|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報(bào)考 +10 | pin8023 2026-02-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩274能調(diào)劑去哪里？ +3 | 22735 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +7 | 學(xué)材料的點(diǎn) 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +7 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 博斯特525 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂(lè)平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +14 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考博] 26申博 求博導(dǎo) +3 | 愛(ài)讀書的小帥 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +6 | 天下熯 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
通訊作者寫誰(shuí)，問(wèn)題是你意想不到的問(wèn)題
 15+3
|
阿爾法啊 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +4 | Ricardo1113 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | repeatt?t 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291分工科求調(diào)劑 +9 | science餓餓 2026-03-01 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +4 | 73372112 2026-02-28 | 6/300 |
|