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[求助]
求教！急！qPCR內(nèi)參Ct值高至35！但之前同樣的手法都能跑出來Ct18-19！ 已有1人參與
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最近提取小鼠肝細胞AML12的RNA 進行逆轉，之后熒光實時PCR。在居家辦公之前，內(nèi)參MPPIA的Ct值有18-19左右，target gene大概26-28左右，都有比較好的擴增曲線和溶解曲線。但是自復工以來，同樣提取得到的RNA，逆轉之后跑實時PCR，內(nèi)參MPPIA的Ct值都已經(jīng)33以上，甚至高于35，或壓根undetermined；target gene全部都是undetermined，溶解曲線根本不規(guī)則。 同樣的手法，同樣的Trizol提取方式，實在不知道是怎么回事了。目前出現(xiàn)這種情況已經(jīng)三次，用別人的RNA sample可以跑出內(nèi)參及target gene。所以懷疑是RNA樣品出問題，但是今天又一次仔仔細細用Trizol提取RNA，包括*頭重新滅菌，所用試劑全部換新的，再三確定無誤，結果依舊不行，內(nèi)參已經(jīng)30好幾，target gene依然undetermined。注：RNA濃度有300ng/ul左右（溶于20ulDEPC），260/280有1.8左右。 已經(jīng)3次了。。同實驗室的前輩也不知道是什么原因導致。。希望大神們能指點一二��！拜謝！@biostar2009@biostar2009@wizardfan@飛約瘋人院 |
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