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漁人圖圖新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教！急！qPCR內(nèi)參Ct值高至35！但之前同樣的手法都能跑出來Ct18-19！ 已有1人參與
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最近提取小鼠肝細(xì)胞AML12的RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)，之后熒光實(shí)時(shí)PCR。在居家辦公之前，內(nèi)參MPPIA的Ct值有18-19左右，target gene大概26-28左右，都有比較好的擴(kuò)增曲線和溶解曲線。但是自復(fù)工以來，同樣提取得到的RNA，逆轉(zhuǎn)之后跑實(shí)時(shí)PCR，內(nèi)參MPPIA的Ct值都已經(jīng)33以上，甚至高于35，或壓根undetermined；target gene全部都是undetermined，溶解曲線根本不規(guī)則。 同樣的手法，同樣的Trizol提取方式，實(shí)在不知道是怎么回事了。目前出現(xiàn)這種情況已經(jīng)三次，用別人的RNA sample可以跑出內(nèi)參及target gene。所以懷疑是RNA樣品出問題，但是今天又一次仔仔細(xì)細(xì)用Trizol提取RNA，包括*頭重新滅菌，所用試劑全部換新的，再三確定無誤，結(jié)果依舊不行，內(nèi)參已經(jīng)30好幾，target gene依然undetermined。注：RNA濃度有300ng/ul左右（溶于20ulDEPC），260/280有1.8左右。 已經(jīng)3次了。。同實(shí)驗(yàn)室的前輩也不知道是什么原因?qū)е�。。希望大神們能指點(diǎn)一二��！拜謝！@biostar2009@biostar2009@wizardfan@飛約瘋?cè)嗽?/u> |
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