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coostudent銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
2kb片段插入總是失敗，搞了半年了，求前輩拯救
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2kb片段插入質(zhì)粒xbaI位點，酶切酶連還有in-fusion的方法都試過了，但是最終挑不到陽性克隆。搞了半年了，感覺就是個簡單的酶切酶連操作，但就是搞不定，心累，想哭，求拯救！ 除了質(zhì)粒，相關的材料都換過了。質(zhì)粒也對酶切位點周圍測了序，沒有問題，理論上也不會發(fā)生甲基化…… 質(zhì)粒是鏈霉菌基因編輯的商業(yè)化質(zhì)粒pCRISPomyces-2 酶切位點XbaI 如需更詳細線索 我會在后面補充 或者有做過相關試驗的小伙伴嗎，求指點！ 多謝！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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23樓2021-02-02 19:35:34
ULYSSEESWB
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2020-01-18 20:29:13
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2020-01-18 20:29:13
| in-fusion也失�。吭O置過陽性對照么？載體自連？試試pcr線性化載體 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2020-01-02 13:15:50
3樓2020-01-02 13:29:17
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2020-01-18 20:29:22
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2020-01-18 20:29:22
| 實在不行試試雙酶切吧，我們實驗室基本都是雙酶切。酶切連接失敗我首先會檢查擴增片段的引物上是否有相應的酶切位點及保護堿基；其次是質(zhì)粒上確實具有這兩個酶切位點序列（一定要在質(zhì)粒上搜到相應的序列，有些質(zhì)粒圖譜畫的不靠譜）。最后考慮試劑是否過期。祝你好運 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2020-01-02 19:49:06
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