 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 8993 | 回復(fù): 9 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
小千100新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
同源重組多片段連接做不出來，我想重新做但又不知道是哪里操作的問題，怎么改進(jìn)? 已有3人參與
|
||
|
使用的是諾維贊多片段連接試劑盒，引物用公司的在線軟件設(shè)計(jì)的。載體8000多bp，三個(gè)片段分別1019，381，250多。 1.載體用takara快切酶雙酶切30min，切膠回收，目的片段分別以之前的2個(gè)T載體擴(kuò)增，一個(gè)質(zhì)粒擴(kuò)增，切膠回收。 2.分別稀釋跑膠估算載體、三個(gè)片段濃度，按片段長度計(jì)算大致每個(gè)片段需要多少ng，加入多少μl 3.按說明書分別加入4μl載體，三個(gè)片段2μl，1μl，1μl，酶和buffer分別2μl，4μl，總體積20μl。37度反應(yīng)30min。 4.10μl重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化100μl大腸桿菌感受態(tài)，過夜培養(yǎng)挑單菌落（比較少） 5.挑了9個(gè)單菌落搖菌提了質(zhì)粒，雙酶切都沒有切出片段。 6.同時(shí)我做了兩個(gè)陰性對照1和2，都長了很多單菌落。1是只加了載體4μl，加水至20μl.2是只加了三個(gè)片段，加水至20μl. @wizardfan @youlinglyw @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有229人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
小千100
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.4
- 帖子: 180
- 在線: 99.8小時(shí)
- 蟲號: 4262155
- 注冊: 2015-12-02
- 性別: MM
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
|
謝謝你的解答。后面我咨詢了技術(shù)，說可能是原本我的載體就沒有切開，陰性對照加入片段長菌的可能是其中一個(gè)片段擴(kuò)增用的模板殘留，這個(gè)模板質(zhì)粒含有同樣的抗性，其實(shí)我也不清楚，后面我重新酶切了載體，重新操作了一遍，連接成功了，也是神奇  發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2019-08-06 19:04:15
小千100
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 86.4
- 帖子: 180
- 在線: 99.8小時(shí)
- 蟲號: 4262155
- 注冊: 2015-12-02
- 性別: MM
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
2樓2019-07-24 10:02:34
xinxiyuzhou
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 78 (初中生)
- 金幣: 13452.5
- 散金: 55
- 紅花: 19
- 帖子: 2045
- 在線: 425小時(shí)
- 蟲號: 1304974
- 注冊: 2011-05-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-07-24 18:02:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-07-24 18:02:51
| 有一個(gè)問題呀，你的陰性對照不加片段或者載體應(yīng)該不會(huì)形成環(huán)狀質(zhì)粒，怎么會(huì)長出菌落呢？另外，你可以試一下將三個(gè)片段通過PCR連接起來再克隆到載體上。諾唯贊來我們這推銷過這個(gè)試劑盒，我覺得沒有什么優(yōu)勢，即使你現(xiàn)在克隆上了，還是要切下來，再進(jìn)行后續(xù)的酶切連接，并沒有省事。個(gè)人建議。 |
3樓2019-07-24 12:13:01
匿名
用戶注銷 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 128 (高中生)
- 金幣: 4550.4
- 散金: 50
- 紅花: 22
- 帖子: 934
- 在線: 645.1小時(shí)
- 蟲號: 0
- 注冊: 2011-10-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2019-07-27 18:40:00
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿211，0860總分286食品工程專業(yè)求調(diào)劑 +6 | 林林Winnie 2026-03-05 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 我嘗試在小木蟲上招計(jì)算機(jī)專業(yè)的調(diào)劑學(xué)生 +3 | littlehu66 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +9 | Faune 2026-03-06 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 不限學(xué)校專業(yè)的調(diào)劑同學(xué)看過來 +5 | 啊擺啊擺 2026-03-05 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +13 | yyqqhh 2026-03-03 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財(cái) 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 083000，總分284，求調(diào)劑 +3 | 徐yr 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +5 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)085600 319分 材料與化工 金屬方向 求調(diào)劑 +6 | 青科11 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué) 280 一志愿太原理工 求調(diào)劑 +8 | 拾玖壹 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 曼殊2266 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +14 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考研]
 一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
+6
|
15779376950 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 請問大家，研究風(fēng)險(xiǎn)與應(yīng)對措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|