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反對(duì)派銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
線型空質(zhì)粒被雙酶切時(shí),為何沒(méi)有看到兩條帶? 已有3人參與
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候,通常含有三種構(gòu)型:超螺旋、線型和單鏈開(kāi)環(huán)。 我的疑問(wèn)是: 1.為何線型的質(zhì)粒,在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí),為何沒(méi)有看到兩條帶? 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的? |
新蟲 (正式寫手)
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因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題一號(hào)回帖人已經(jīng)回答的很好了,線性質(zhì)粒是轉(zhuǎn)不進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
銀蟲 (正式寫手)
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候,通常含有三種構(gòu)型:超螺旋、線型和單鏈開(kāi)環(huán)。 我的疑問(wèn)是: 1.為何線型的質(zhì)粒,在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí),為何沒(méi)有看到兩條帶? 答:用質(zhì)粒提取試劑盒一般能看到超螺旋(90%)、線型(5%)和單鏈開(kāi)環(huán)(15%),數(shù)據(jù)只是個(gè)大概,可能有偏差,一般超螺旋的會(huì)占絕大部分;酶切后,雙鏈都開(kāi)的情況濃度很低,電泳的時(shí)候觀察不到。 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 答:轉(zhuǎn)化普通的大腸桿菌不會(huì)長(zhǎng)菌落,一般酶切不干凈(即使膠回純化等)也會(huì)長(zhǎng)少量菌落,這個(gè)是正,F(xiàn)象 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的? 答:不是固定的,隨機(jī);比例少,可以忽略 |
銀蟲 (正式寫手)
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