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反對(duì)派銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
線(xiàn)型空質(zhì)粒被雙酶切時(shí)，為何沒(méi)有看到兩條帶？ 已有3人參與
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候，通常含有三種構(gòu)型：超螺旋、線(xiàn)型和單鏈開(kāi)環(huán)。 我的疑問(wèn)是： 1.為何線(xiàn)型的質(zhì)粒，在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí)，為何沒(méi)有看到兩條帶？ 2.線(xiàn)型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線(xiàn)性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的？ |
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2樓2019-05-28 08:39:08
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反對(duì)派: 金幣+2, 謝謝您的回復(fù)。 2019-05-31 08:24:32
反對(duì)派: 金幣+2, 謝謝您的回復(fù)。 2019-05-31 08:24:32
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候，通常含有三種構(gòu)型：超螺旋、線(xiàn)型和單鏈開(kāi)環(huán)。 我的疑問(wèn)是： 1.為何線(xiàn)型的質(zhì)粒，在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí)，為何沒(méi)有看到兩條帶？ 答：用質(zhì)粒提取試劑盒一般能看到超螺旋（90%）、線(xiàn)型（5%）和單鏈開(kāi)環(huán)（15%），數(shù)據(jù)只是個(gè)大概，可能有偏差，一般超螺旋的會(huì)占絕大部分；酶切后，雙鏈都開(kāi)的情況濃度很低，電泳的時(shí)候觀察不到。 2.線(xiàn)型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 答：轉(zhuǎn)化普通的大腸桿菌不會(huì)長(zhǎng)菌落，一般酶切不干凈（即使膠回純化等）也會(huì)長(zhǎng)少量菌落，這個(gè)是正�，F(xiàn)象 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線(xiàn)性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的？ 答：不是固定的，隨機(jī)；比例少，可以忽略 |
3樓2019-05-29 10:40:55
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4樓2019-05-31 08:33:51
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5樓2019-06-01 09:41:32
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6樓2019-06-03 07:35:55
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因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題一號(hào)回帖人已經(jīng)回答的很好了，線(xiàn)性質(zhì)粒是轉(zhuǎn)不進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞的 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
7樓2019-07-30 09:06:55
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8樓2019-08-03 19:06:36
_Mario
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感受態(tài)沒(méi)轉(zhuǎn)過(guò)線(xiàn)性的，一般都是環(huán)狀，真核微藻但是轉(zhuǎn)過(guò)，而且可以挑出陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。您可以試一下，有完整的抗性基因表達(dá)盒應(yīng)該就可以。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
9樓2019-10-09 22:51:01
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