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線型空質(zhì)粒被雙酶切時(shí)，為何沒有看到兩條帶？ 已有3人參與
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候，通常含有三種構(gòu)型：超螺旋、線型和單鏈開環(huán)。 我的疑問是： 1.為何線型的質(zhì)粒，在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí)，為何沒有看到兩條帶？ 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的？ |
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4樓2019-05-31 08:33:51
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2樓2019-05-28 08:39:08
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反對(duì)派: 金幣+2, 謝謝您的回復(fù)。 2019-05-31 08:24:32
反對(duì)派: 金幣+2, 謝謝您的回復(fù)。 2019-05-31 08:24:32
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時(shí)候，通常含有三種構(gòu)型：超螺旋、線型和單鏈開環(huán)。 我的疑問是： 1.為何線型的質(zhì)粒，在利用多克隆位點(diǎn)內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時(shí)，為何沒有看到兩條帶？ 答：用質(zhì)粒提取試劑盒一般能看到超螺旋（90%）、線型（5%）和單鏈開環(huán)（15%），數(shù)據(jù)只是個(gè)大概，可能有偏差，一般超螺旋的會(huì)占絕大部分；酶切后，雙鏈都開的情況濃度很低，電泳的時(shí)候觀察不到。 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞會(huì)不會(huì)長(zhǎng)出抗性菌落。 答：轉(zhuǎn)化普通的大腸桿菌不會(huì)長(zhǎng)菌落，一般酶切不干凈（即使膠回純化等）也會(huì)長(zhǎng)少量菌落，這個(gè)是正�，F(xiàn)象 3.抽提質(zhì)粒時(shí)每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點(diǎn)是不是固定的？ 答：不是固定的，隨機(jī)；比例少，可以忽略 |
3樓2019-05-29 10:40:55
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5樓2019-06-01 09:41:32
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