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反對派銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
線型空質(zhì)粒被雙酶切時,為何沒有看到兩條帶? 已有3人參與
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時候,通常含有三種構(gòu)型:超螺旋、線型和單鏈開環(huán)。 我的疑問是: 1.為何線型的質(zhì)粒,在利用多克隆位點內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時,為何沒有看到兩條帶? 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞會不會長出抗性菌落。 3.抽提質(zhì)粒時每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點是不是固定的? |
銀蟲 (正式寫手)
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各位同仁都知道抽提空質(zhì)粒的時候,通常含有三種構(gòu)型:超螺旋、線型和單鏈開環(huán)。 我的疑問是: 1.為何線型的質(zhì)粒,在利用多克隆位點內(nèi)的酶單酶切或者雙酶切時,為何沒有看到兩條帶? 答:用質(zhì)粒提取試劑盒一般能看到超螺旋(90%)、線型(5%)和單鏈開環(huán)(15%),數(shù)據(jù)只是個大概,可能有偏差,一般超螺旋的會占絕大部分;酶切后,雙鏈都開的情況濃度很低,電泳的時候觀察不到。 2.線型質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞會不會長出抗性菌落。 答:轉(zhuǎn)化普通的大腸桿菌不會長菌落,一般酶切不干凈(即使膠回純化等)也會長少量菌落,這個是正常現(xiàn)象 3.抽提質(zhì)粒時每次產(chǎn)生線性質(zhì)粒的斷裂位點是不是固定的? 答:不是固定的,隨機;比例少,可以忽略 |
銀蟲 (正式寫手)
銀蟲 (正式寫手)
銀蟲 (正式寫手)
新蟲 (正式寫手)
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因為這個問題一號回帖人已經(jīng)回答的很好了,線性質(zhì)粒是轉(zhuǎn)不進感受態(tài)細胞的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
新蟲 (小有名氣)
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感受態(tài)沒轉(zhuǎn)過線性的,一般都是環(huán)狀,真核微藻但是轉(zhuǎn)過,而且可以挑出陽性轉(zhuǎn)化子。您可以試一下,有完整的抗性基因表達盒應(yīng)該就可以。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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