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innocent.新蟲(chóng) (初入文壇)
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無(wú)縫克隆遇到的奇奇怪怪 已有1人參與
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| 最近構(gòu)建載體,想速度快一點(diǎn)就沒(méi)用T4,直接用無(wú)縫克隆但一直失。ㄓ玫闹Z唯贊試劑盒),酶切后無(wú)縫連接轉(zhuǎn)DH5a挑單菌落PCR,用目的片段引物P就有條帶且條帶長(zhǎng)度正確,但用載體引物就一直p不出來(lái),換了載體引物也不行,又提質(zhì)粒酶切后發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)度與空載體長(zhǎng)度一致,是不是說(shuō)明沒(méi)連上,那為什么拿目的片段引物能p出來(lái)呢?實(shí)在疑惑,已經(jīng)重復(fù)做好幾次了都是這樣,三個(gè)基因都是這個(gè)問(wèn)題,大家有出現(xiàn)過(guò)這樣的情況嗎? |
金蟲(chóng) (小有名氣)
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