 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 843 | 回復: 4 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者LUCINA*將贈送您 5 個金幣 | ||
[求助]
請教關于轉(zhuǎn)染的若干問題
|
||
|
我最近在進行轉(zhuǎn)染，用的是QIAGEN品牌的Attractene轉(zhuǎn)染試劑，體系按照說明書配置的，轉(zhuǎn)染六孔板，結(jié)果在WB后發(fā)現(xiàn)檢不出標簽。這個基因是之前師兄探索過的一個基因，表達應該是沒有問題的。用了了Abways和Abclonal的一抗都不行。也轉(zhuǎn)過GFP標簽顯微鏡下熒光很低，就是沒轉(zhuǎn)進去。后來換了碧云天的lipo6000轉(zhuǎn)染試劑和CST抗體就可以檢出來。但是我?guī)熜终f他之前用的是Abways的抗體，我現(xiàn)在用這個品牌抗體孵不出就是有問題，懷疑我檢出來的就不是那個基因。 而且最近我用CST抗體孵育發(fā)現(xiàn)空載也有帶（大哭！） 有懂轉(zhuǎn)染的同學解答一下嗎（球球） 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有163人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
Glenice Y
新蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1547.7
- 散金: 50
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 555
- 在線: 72.1小時
- 蟲號: 25353622
- 注冊: 2021-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
|
首先就要排除你是否轉(zhuǎn)進去了，正常你需要對照，就像你的GFP理論上是同一個載體，只有這個蛋白這個區(qū)域不同。另外WB需要內(nèi)參，那樣起碼能夠證明WB整個流程什么的沒有問題，同時包括提蛋白的過程。另外你說熒光很低，那就側(cè)面說明表達量不高。但是理論上只要有表達，WB也能檢測出來。如果沒有目的帶，檢查一抗，或者提高一抗比例，然后就是顯影的時候調(diào)長時間，跑膠的時候盡量多上點樣。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-11-03 00:16:25
Glenice Y
新蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1547.7
- 散金: 50
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 555
- 在線: 72.1小時
- 蟲號: 25353622
- 注冊: 2021-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
|
但是我感覺主要問題出在你的轉(zhuǎn)染上面了，我們用的thermo的lipo兩千 之前也用過國產(chǎn)的 轉(zhuǎn)質(zhì)�；径急磉_量很高，沒有出現(xiàn)你上述情況過。CST的抗體確實比其他的好點，我們也用過這個牌子。但是空載也有帶的話，那你這完全不能說明什么了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2023-11-03 00:18:38
Glenice Y
新蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1547.7
- 散金: 50
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 555
- 在線: 72.1小時
- 蟲號: 25353622
- 注冊: 2021-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
|
另外，你說理論上表達沒有問題，其實我不太贊同，你可以拿這個沾染的質(zhì)粒測一下序，看看是否出現(xiàn)移碼突變等等情況，這種都可能存在的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2023-11-03 00:20:39
|
謝謝大佬，這個質(zhì)粒我們也測過序了，沒發(fā)現(xiàn)有突變，別人轉(zhuǎn)染效果也不太好。后來換了HA標簽就好多了。但是也沒有別人的表達量高。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2023-11-15 20:09:32
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 LUCINA* 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +5 | Gale1314 2026-03-06 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 +3 | vs9ky3szrj 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | wxz2 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工（高分子）290分求調(diào)劑 +9 | wengyujian 2026-03-04 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 材料工程調(diào)劑
+6
|
zbcm_zbcm 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，一志愿鄭州大學，280分求調(diào)劑 +7 | Wuqi725 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +6 | 啊歐歐歐 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化學 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +9 | 土土小蟲 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +6 | 熊境喆 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +6 | 等春來， 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學306調(diào)劑 +4 | 26要上岸 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 好運連綿不絕 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | MuoLuo1312 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854復試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +9 | 滿頭大汗的學生 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 亭亭亭01 2026-03-01 | 6/300 |
|