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aaabndj新蟲 (初入文壇)
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[交流]
大腸桿菌轉(zhuǎn)化 有菌 一直無陽性？ 已有3人參與
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大腸桿菌轉(zhuǎn)化 有菌 無陽性 之前構(gòu)過的一個(gè)載體，我做了三次，都沒構(gòu)出來 平末端 直接重組的 流程就是擴(kuò)基因，切載體，重組 ，沒用T4連接酶，最后板子上長了菌，但是菌檢一個(gè)陽性都沒有 做了三次了都做不出來，師姐讓我下次用T4連接，到底是哪一步出錯(cuò)了啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2023-08-07 08:25:57
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第一，擴(kuò)基因用的酶擴(kuò)增出的片段是平末端嗎，有的酶擴(kuò)增結(jié)束會(huì)在3‘加A;第二，平末端連接也應(yīng)該使用T4連接酶才能連上吧，沒有磷酸二酯鍵形成不了質(zhì)粒，線性片段轉(zhuǎn)進(jìn)菌裡很快就被降解了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2023-08-07 15:36:16
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4樓2023-08-13 14:04:32
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5樓2023-08-14 14:54:51
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