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aaabndj新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
大腸桿菌轉(zhuǎn)化 有菌 一直無(wú)陽(yáng)性？ 已有3人參與
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大腸桿菌轉(zhuǎn)化 有菌 無(wú)陽(yáng)性 之前構(gòu)過(guò)的一個(gè)載體，我做了三次，都沒(méi)構(gòu)出來(lái) 平末端 直接重組的 流程就是擴(kuò)基因，切載體，重組 ，沒(méi)用T4連接酶，最后板子上長(zhǎng)了菌，但是菌檢一個(gè)陽(yáng)性都沒(méi)有 做了三次了都做不出來(lái)，師姐讓我下次用T4連接，到底是哪一步出錯(cuò)了啊 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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這種情況肯定是先檢查質(zhì)粒了，切開(kāi)看看是不是正常 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2023-08-07 08:25:57
黃黑波波
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第一，擴(kuò)基因用的酶擴(kuò)增出的片段是平末端嗎，有的酶擴(kuò)增結(jié)束會(huì)在3‘加A;第二，平末端連接也應(yīng)該使用T4連接酶才能連上吧，沒(méi)有磷酸二酯鍵形成不了質(zhì)粒，線(xiàn)性片段轉(zhuǎn)進(jìn)菌裡很快就被降解了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
3樓2023-08-07 15:36:16
aaabndj
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這次用T4重做了，菌檢有陽(yáng)性，但是挑菌搖菌，第二天提質(zhì)粒酶切驗(yàn)證的時(shí)候，又切不開(kāi) 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
4樓2023-08-13 14:04:32
shuaibia6
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5樓2023-08-14 14:54:51
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