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Milkttttea新蟲 (初入文壇)
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[交流]
酶切連接構(gòu)建載體一直連接不上
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切入DNA片段1385bp，載體4729bp 跑膠看亮度，片段大概10ng/ul，載體大概40ng/ul 片段加了15ul，載體2ul，buffer2ul，T4連接酶1ul，摩爾比大概1:6.5。 為什么一直連接不上呢？amp板上一個單克隆都沒有 卡在這個實(shí)驗(yàn)已經(jīng)一個月多了真的頭禿了！ 求幫助！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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片段是轉(zhuǎn)ta克隆再酶切的，酶切下來是兩條帶，載體和片段。不過我想起當(dāng)時切目的載體質(zhì)粒的時候，大概沒切完全，有三條帶，就是除了載體和兩酶切位點(diǎn)片段以外還有條完整質(zhì)粒的帶，但我當(dāng)時就直接切了載體的帶回收了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2022-08-11 14:57:49
Milkttttea
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2樓2022-08-07 11:04:02
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3樓2022-08-08 18:23:18
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昨天又做了兩板，載體53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，儀器測得濃度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10體系，1:7做了20體系，都沒有長單克隆，我真的好迷茫啊，到底問題出在哪里了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2022-08-10 09:37:30
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