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Milkttttea新蟲 (初入文壇)
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[交流]
酶切連接構(gòu)建載體一直連接不上
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切入DNA片段1385bp，載體4729bp 跑膠看亮度，片段大概10ng/ul，載體大概40ng/ul 片段加了15ul，載體2ul，buffer2ul，T4連接酶1ul，摩爾比大概1:6.5。 為什么一直連接不上呢？amp板上一個(gè)單克隆都沒有 卡在這個(gè)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)一個(gè)月多了真的頭禿了！ 求幫助！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2022-08-07 11:04:02
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3樓2022-08-08 18:23:18
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昨天又做了兩板，載體53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，儀器測(cè)得濃度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10體系，1:7做了20體系，都沒有長單克隆，我真的好迷茫啊，到底問題出在哪里了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2022-08-10 09:37:30
tjj451679479
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5樓2022-08-11 11:42:12
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載體和片段都是用的同樣兩個(gè)酶進(jìn)行酶切的，載體質(zhì)粒amp抗性，也用同樣的抗性板轉(zhuǎn)化感受態(tài)過 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2022-08-11 14:53:17
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片段是轉(zhuǎn)ta克隆再酶切的，酶切下來是兩條帶，載體和片段。不過我想起當(dāng)時(shí)切目的載體質(zhì)粒的時(shí)候，大概沒切完全，有三條帶，就是除了載體和兩酶切位點(diǎn)片段以外還有條完整質(zhì)粒的帶，但我當(dāng)時(shí)就直接切了載體的帶回收了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2022-08-11 14:57:49
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9樓2022-08-18 01:42:22
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10樓2022-08-18 01:43:07
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