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[交流]
酶切連接構(gòu)建載體一直連接不上
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切入DNA片段1385bp,載體4729bp 跑膠看亮度,片段大概10ng/ul,載體大概40ng/ul 片段加了15ul,載體2ul,buffer2ul,T4連接酶1ul,摩爾比大概1:6.5。 為什么一直連接不上呢?amp板上一個單克隆都沒有 卡在這個實驗已經(jīng)一個月多了真的頭禿了! 求幫助! 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
鐵蟲 (初入文壇)
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昨天又做了兩板,載體53.2ng/ul,片段15.7ng/ul,儀器測得濃度,OD260/280都有1.8。1:3比例做了10體系,1:7做了20體系,都沒有長單克隆,我真的好迷茫啊,到底問題出在哪里了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
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片段是轉(zhuǎn)ta克隆再酶切的,酶切下來是兩條帶,載體和片段。不過我想起當時切目的載體質(zhì)粒的時候,大概沒切完全,有三條帶,就是除了載體和兩酶切位點片段以外還有條完整質(zhì)粒的帶,但我當時就直接切了載體的帶回收了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
銅蟲 (正式寫手)
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