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[交流]
關于滾環(huán)擴增的問題求助
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我最近在做滾環(huán)擴增產物與帶有熒光基團和猝滅基團的莖環(huán)序列雜交的實驗，通過讓莖環(huán)打開，來實現信號的放大。但是我試了很多辦法，幾乎檢測不到信號，甚至實驗組比空白實驗信號還要低。我檢查了序列配對，沒有任何問題。而我通過讓莖環(huán)序列與它互補的單鏈結合，就會產生明顯的信號，證明莖環(huán)序列是沒有問題的。 我覺得是莖環(huán)序列沒有與滾環(huán)擴增產物結合上。 所以希望各位能給點建議或指導，是什么原因導致的這個問題，或者說大家有什么意見或者建議，感謝大家的幫助和指導。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2022-01-14 12:13:34
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結合上的話，熒光團會遠離猝滅團，產生熒光信號。擴增成功的表現是可以通過凝膠電泳實驗，觀察到有明亮條帶。目前是，有正確的條帶，但是加入莖環(huán)序列后經過檢測沒有信號。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2022-01-14 14:41:46
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4樓2022-01-14 15:52:19
5樓2022-01-14 16:03:10
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6樓2022-01-14 17:20:17
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溫度是相近的，不過沒有加入單鏈DNA結合蛋白，因為需要進一步反應，連接熒光序列。我在想，能不能在進行進行擴增反應開始時，加入熒光序列，會不會好一些。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2022-01-16 21:50:29
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