 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1332 | 回復(fù): 3 | ||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者Dusk_star將贈送您 5 個金幣 | ||
Dusk_star新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
[求助]定點(diǎn)突變pcr產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化后提不出質(zhì)粒
|
|
|
最近在做定點(diǎn)突變，設(shè)計上下游引物30bp左右，突變位點(diǎn)在中間，目的基因3300bp，加質(zhì)�？傞L9000bp左右。 PCR之后用DpnⅠ消除模板，轉(zhuǎn)化JM109或BL21，然后挑菌送測序。最近總出現(xiàn)挑到的菌提質(zhì)粒濃度很低是（三四十左右），送不了測序的那種，偶爾提出質(zhì)粒濃度正常的還是模板情況。 而且我發(fā)現(xiàn)這種提不出質(zhì)粒的情況不管IM109還是BL21都會出現(xiàn)，在提質(zhì)粒過程中，加完P(guān)3 buffer混勻后，雖然有絮狀沉淀但是液體渾濁（正常加完P(guān)3后，出現(xiàn)絮狀沉淀，液體澄清透亮）。 之前也做了一批突變，還算正常。最近做的時候就總出現(xiàn)，想不到哪里出了問題。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測的實(shí)際應(yīng)用案例
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗中的趣事：實(shí)驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有182人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗中的趣事：和實(shí)驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗之小鼠實(shí)驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
tmoonday
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 2999.9
- 散金: 10
- 紅花: 2
- 帖子: 290
- 在線: 323小時
- 蟲號: 1703018
- 注冊: 2012-03-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2021-12-09 22:40:23
小汰寶
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1382.7
- 散金: 216
- 紅花: 3
- 帖子: 577
- 在線: 44.9小時
- 蟲號: 3897142
- 注冊: 2015-05-29
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
|
1. 像樓上所說，用DH5α試試。JM109不了解，但是做突變轉(zhuǎn)BL21的話效率很低 2. 環(huán)P質(zhì)粒9000bp成功率也比較低。這么長質(zhì)粒上的定點(diǎn)突變我一般只p個小幾百bp的片段做突變，同時p剩下的載體部分最后做同源重組。麻煩是麻煩一些，但是成功率非常高 3. 你對9000bp質(zhì)粒環(huán)p后看過膠圖嗎？目標(biāo)條帶應(yīng)該不濃吧？你非要大質(zhì)粒環(huán)p的話可以加甘油/dmso試下 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2022-03-03 19:24:22
L_大松子
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1726.3
- 散金: 60
- 帖子: 652
- 在線: 30.3小時
- 蟲號: 8628709
- 注冊: 2018-04-26
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
4樓2022-08-12 00:33:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Dusk_star 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑，總分320分，一志愿中南民族大學(xué) +3 | 19286712440 2026-03-04 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 成績276，專業(yè)代碼0856求調(diào)劑 +8 | 小陳朵 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級已過 求調(diào)劑 +5 | ccc! 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 小賽不吃香菜 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +6 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程269求調(diào)劑 +7 | 白刺玫 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +7 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 學(xué)碩 理工科均可 不區(qū)分研究方向 總分279求調(diào)劑 +5 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工專碩調(diào)劑 +4 | 利好利好. 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | ErMiao1020 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | 滿天星11_22 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 誠招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265分求調(diào)劑不調(diào)專業(yè)和學(xué)校有行學(xué)上就 +6 | 禮堂丁真258 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +5 | 2026計算機(jī)_誠心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|