 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2779 | 回復(fù): 3 | ||||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者小汰寶將贈送您 5 個金幣 | ||||
小汰寶金蟲 (正式寫手)
|
[求助]
RBS+第一個蛋白（有終止密碼子）+第二個蛋白（有終止密碼子），會正常表達(dá)嗎？ 已有1人參與
|
|||
|
想構(gòu)建2個蛋白在pet28a載體上。序列大概是： T7啟動子——RBS——第一個蛋白（有終止密碼子）——78bp （血清酶切割位點(diǎn)和T7 tag）——第二個蛋白（有終止密碼子） 第二個蛋白前是沒有RBS的 請問這樣第二個蛋白能正常表達(dá)嗎？還是第二個蛋白表達(dá)量會少一點(diǎn)？還是第二個蛋白因為沒有RBS所以根本不會有表達(dá)？ 求助，感謝。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有168人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10476
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1101小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
翻譯蛋白，需要核糖體結(jié)合mRNA 如果沒有核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ribosome binding site），核糖體結(jié)合的可能性會低很多，意味著蛋白表達(dá)的可能性會低很多。 現(xiàn)在有很多雙表達(dá)的質(zhì)粒，插入MCS1和MCS2就可以同時表達(dá)兩個基因。 或者只有一個RBS，但是第一個基因以TAA結(jié)尾，第二個基因以ATG開頭，中間重合一個A，TAATG，核糖體在翻譯完第一個基因后，距離第二個基因很近，也能把第二個基因翻譯了。事實上，很多病毒基因就是這么排列的。 以上只是分析，一切還是看實驗結(jié)果。你的第二個基因表達(dá)了么？ |
2樓2021-02-06 10:03:07
小汰寶
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1382.7
- 散金: 216
- 紅花: 3
- 帖子: 577
- 在線: 44.9小時
- 蟲號: 3897142
- 注冊: 2015-05-29
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
|
太感謝了！ 我是在構(gòu)建一個融合蛋白突變庫的時候，找到一個突變體，效果特別好，但是測序發(fā)現(xiàn)這個突變體序列在in fusion連接的時候發(fā)生了錯配，完全沒有按我們預(yù)計的走，卻表現(xiàn)出了較高的蛋白2的酶活和極少的包涵體，所以很困惑。 設(shè)計的融合蛋白突變庫的構(gòu)建： T7啟動子——RBS——第一個蛋白做隨機(jī)突變（無終止密碼子）——78bp （血清酶切割位點(diǎn)和T7 tag）——第二個蛋白（有終止密碼子） 找到的這個的hit: T7啟動子——RBS——第一個蛋白，有隨機(jī)突變，但是大約只有原蛋白前3/4部分（有終止密碼子）——78bp （血清酶切割位點(diǎn)和T7 tag）——第一個蛋白有隨機(jī)突變，但是大約只有原蛋白前1/2部分（無終止密碼子）——78bp （血清酶切割位點(diǎn)和T7 tag）——第二個蛋白（有終止密碼子） 這個hit等于變成了我題目中問的那個樣子。 測序應(yīng)該沒有問題，此序列來自雙向測序結(jié)果。 這個hit做蛋白2的催化，表現(xiàn)非常好。現(xiàn)在不知道怎么解釋這個機(jī)理機(jī)制，畢竟原以為發(fā)生這種錯連的突變，蛋白2應(yīng)該沒表達(dá)才對。 |
3樓2021-02-06 10:17:15
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10476
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1101小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
4樓2021-02-06 10:29:19
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小汰寶 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急 +3 | 7x4iz20zqa 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程330分求調(diào)劑，一志愿985 +5 | 小材化本科 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿安徽大學(xué)材料工程專碩313分，求調(diào)劑的學(xué)校 +7 | Yu先生 2026-03-10 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料工程085601調(diào)劑求老師收留 +8 | 強(qiáng)木木木 2026-03-07 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 鶴遨予卿 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +5 | 陌宸希 2026-03-10 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 哈工大材料324求調(diào)劑 +6 | 閆旭東 2026-03-10 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | Vv呀！ 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿蘇州大學(xué)，0856化工323分 | 本科應(yīng)化 | 有專利/競賽/科研助手經(jīng)歷 | +7 | 橙子cyx 2026-03-06 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程295求調(diào)劑，一志愿A區(qū)211 +8 | 等春來， 2026-03-06 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑 +15 | qqyyaill 2026-03-05 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | Yyt楊1 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程專碩求調(diào)劑 +5 | 幼稚園大班打手 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)（0805）338 求調(diào)劑 +7 | xiaokang3286 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 085600 280數(shù)二英二求調(diào)劑 +3 | 月山斜 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩323求調(diào)劑 +5 | 李白26 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 大爆炸難民 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，一志愿鄭州大學(xué)，280分求調(diào)劑 +7 | Wuqi725 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|