 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2907 | 回復(fù): 31 | |||
| 【有獎(jiǎng)交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會(huì)分得作者 ylian0 的 25 個(gè)金幣 ，回帖就立即獲得 1 個(gè)金幣，每人有 1 次機(jī)會(huì) | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
qPCR標(biāo)曲正常，但是結(jié)果比理論值高1~2個(gè)數(shù)量級(jí)，求大家?guī)兔Ψ治鲈颉?
|
|||
|
大家好，我這邊最近做qPCR絕對(duì)定量遇到一個(gè)現(xiàn)象，就是qPCR的結(jié)果和我的菌液鏡檢結(jié)果相差1~2個(gè)數(shù)量級(jí)，下面把結(jié)果和實(shí)驗(yàn)中的一些參數(shù)給大家看看，請(qǐng)幫忙分析一下。 我的qPCR結(jié)果顯示我菌液濃度約為8E+11copies/ml，顯微鏡檢結(jié)果約為3E+9個(gè)/ml。 由于不確定細(xì)菌基因拷貝數(shù)，假如拷貝數(shù)為10，qPCR的結(jié)果仍然是8E+10 cell/ml，還是比顯微鏡檢高了1個(gè)數(shù)量級(jí)。 雖然顯微鏡檢也是相對(duì)定量，結(jié)果有與實(shí)際值有偏差，但是10倍差在顯微鏡下差異還是很大的。 我是提取的質(zhì)粒DNA，用qubit測(cè)的濃度為84ng/μl，目的片段堿基數(shù)分別為A:T:C:G=59:50:73:95（合計(jì)277），質(zhì)粒用的pMD-19T堿基數(shù)A:T:C:G=662：:69:676:686（合計(jì)2693），計(jì)算公式為：標(biāo)品拷貝數(shù)=84x(6.02E+23)/(277+2693)/660，質(zhì)粒標(biāo)品濃度為2.58E+10 copies/μl，質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋取2~8次方進(jìn)行qPCR檢測(cè)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)：擴(kuò)增效率90.6%，R2=0.999，slope=-3.571 溶劑曲線：?jiǎn)畏澹瑹o非特異性擴(kuò)增 樣品DNA稀釋100倍進(jìn)行qPCR檢測(cè)，下機(jī)拷貝數(shù)為：1.56E+7 copies/μl 用0.2ml菌液離心洗滌，400μl重懸破壁后取上清200μl提DNA，50μl去離子水洗脫， DNA拷貝數(shù)計(jì)算公式為：菌液DNA含量（copies/ml）=（1.56E+7）x100x50x2/0.2，結(jié)果約為8E+11copies/ml 小木蟲今天沒法上傳圖片，只能辛苦大家看文字版了，謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有283人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
上海優(yōu)秀男生誠(chéng)征結(jié)婚女友符合微信聯(lián)系
+3/769
-
招收蘇州國(guó)家實(shí)驗(yàn)室和蘇州大學(xué)聯(lián)合培養(yǎng)博士（2026年9月入學(xué)）
+1/85
-
arXiv 預(yù)印本求推薦
+2/48
-
關(guān)于碳量子點(diǎn)抗菌的研究
+1/47
-
湖北省屬重點(diǎn)大學(xué)招收2026年材料、化學(xué)、物理背景碩士
+2/42
-
新疆大學(xué)招收學(xué)碩調(diào)劑
+1/36
-
澳門大學(xué)中藥機(jī)制與質(zhì)量研究全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室碩士研究生
+1/34
-
清華大學(xué)環(huán)境學(xué)院賀克斌院士團(tuán)隊(duì)招聘博士后
+1/33
-
廈門大學(xué)航空航天學(xué)院智能制造課題組招2026年申請(qǐng)審核制博士生1名
+1/26
-
北京理工大學(xué)-化學(xué)與化工學(xué)院-招收2026級(jí)博士生 [申請(qǐng)-考核制]
+1/21
-
【碳足跡與碳中和戰(zhàn)略】招收碩士、博士、博士后、科研助理
+1/8
-
中南林業(yè)科技大學(xué)《微生物學(xué)》2026年博士生招生（“申請(qǐng)-審核”錄�。�
+1/7
-
請(qǐng)問為什么我的貼子自動(dòng)到“已刪除的主題”里而沒有被發(fā)布？
+1/5
-
北京高校副校長(zhǎng)團(tuán)隊(duì)招收機(jī)械類，環(huán)境類學(xué)碩和專碩
+1/4
-
中國(guó)石油大學(xué)（北京）國(guó)家級(jí)大人才團(tuán)隊(duì)博士招生3名：化學(xué)、材料、石油工程：油田化學(xué)
+1/4
-
復(fù)試可能過不了想調(diào)劑
+1/3
-
歡迎報(bào)考中山大學(xué)課題組，提供2026級(jí)碩士研究生名額
+1/2
-
095400 森林培育 303求調(diào)劑
+1/2
-
接收材料類調(diào)劑
+1/2
-
礦業(yè)工程招收碩士研究生
+1/2
32樓2024-08-23 15:54:57
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
★
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2020-11-20 23:44:04
★
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
|
最后沒明白為什么要乘以二，而且感覺應(yīng)該跟質(zhì)粒的拷貝數(shù)進(jìn)行比較吧，qpcr首次接觸，只是個(gè)人觀點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
14樓2020-11-21 23:47:01
簡(jiǎn)單回復(fù)
icanspll5樓
2020-11-21 14:01
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
zzhello6樓
2020-11-21 14:01
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
yaqianye7樓
2020-11-21 14:01
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
蓉蓉番薯8樓
2020-11-21 14:01
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
2020-11-21 14:02
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
Haibo_10樓
2020-11-21 14:04
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
howtoge11樓
2020-11-21 14:05
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
shehuifei12樓
2020-11-21 14:05
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
gofast11213樓
2020-11-21 14:11
回復(fù)
ylian0(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲Android客戶端
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-11 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料與化工085600調(diào)劑求老師收留 +5 | jiaanl 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
[考研] 420求調(diào)劑 +3 | 莫向外求11 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +5 | 呵唔哦豁 2026-03-10 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085602化工求調(diào)劑 +7 | 董boxing 2026-03-10 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0817學(xué)碩華東區(qū)求調(diào)劑 +3 | 30660438 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0860求調(diào)劑（272分） +3 | lllllcsjsj 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大化工（085600）調(diào)劑總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +11 | 與冬清寧 2026-03-07 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +8 | Gale1314 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿：武漢理工，材料工程，英二數(shù)二 總分314 +3 | 2202020125 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +5 | 撲風(fēng)鈴的貓 2026-03-08 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +4 | xxxcm 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 293一志愿華東理工 0817化學(xué)工程與技術(shù) 調(diào)劑 +5 | fjj0912 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程專碩求調(diào)劑 +5 | 幼稚園大班打手 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博自薦 +9 | 烷基八氮- 2026-03-06 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-08 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +6 | Trying] 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +7 | 夕～日 2026-03-05 | 8/400 |
|