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LiZhouya新蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA提取/蛋白提取
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大家好，我有以下問題想向大家求助一下： 1、用來提取RNA或者蛋白的小鼠皮膚組織，由于樣本量較大，取樣之后，放在冰上，過了幾個小時之后才放到-80℃保存，這樣的情況下，對提取RNA或者蛋白會有影響嗎？ 2、組織需要用PBS清洗之后再放進EPP管中嗎？如果需要，PBS的殘留會對提取目標(biāo)產(chǎn)物有影響嗎？（液氮研磨+TRIzol 法提取RNA） 3、液氮研磨的時間最好控制在多久之內(nèi)呢？ 4、之前提取的RNA基本都只有5S位置的條帶，請問都有哪些問題會造成這樣的影響呢？ 11111.png |
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atikou
銅蟲 (小有名氣)
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第一，會有很大的影響，因為冰的溫度在0℃以上，這個溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會上升上去，時間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時間太長，研磨的時候沒有控制好溫度。------來自易基因的回答 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2021-09-05 15:36:49
atikou
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第一，會有很大的影響，因為冰的溫度在0℃以上，這個溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會上升上去，時間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時間太長，研磨的時候沒有控制好溫度。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2021-09-05 15:35:41
atikou
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第一，會有很大的影響，因為冰的溫度在0℃以上，這個溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會上升上去，時間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時間太長，研磨的時候沒有控制好溫度。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-09-05 15:36:24
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