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LiZhouya新蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA提取/蛋白提取
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大家好，我有以下問題想向大家求助一下： 1、用來提取RNA或者蛋白的小鼠皮膚組織，由于樣本量較大，取樣之后，放在冰上，過了幾個(gè)小時(shí)之后才放到-80℃保存，這樣的情況下，對(duì)提取RNA或者蛋白會(huì)有影響嗎？ 2、組織需要用PBS清洗之后再放進(jìn)EPP管中嗎？如果需要，PBS的殘留會(huì)對(duì)提取目標(biāo)產(chǎn)物有影響嗎？（液氮研磨+TRIzol 法提取RNA） 3、液氮研磨的時(shí)間最好控制在多久之內(nèi)呢？ 4、之前提取的RNA基本都只有5S位置的條帶，請(qǐng)問都有哪些問題會(huì)造成這樣的影響呢？ 11111.png |
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atikou
銅蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
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第一，會(huì)有很大的影響，因?yàn)楸臏囟仍?℃以上，這個(gè)溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時(shí)可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對(duì)于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會(huì)上升上去，時(shí)間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時(shí)間太長(zhǎng)，研磨的時(shí)候沒有控制好溫度。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-09-05 15:36:24
atikou
銅蟲 (小有名氣)
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第一，會(huì)有很大的影響，因?yàn)楸臏囟仍?℃以上，這個(gè)溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時(shí)可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對(duì)于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會(huì)上升上去，時(shí)間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時(shí)間太長(zhǎng)，研磨的時(shí)候沒有控制好溫度。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2021-09-05 15:35:41
atikou
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第一，會(huì)有很大的影響，因?yàn)楸臏囟仍?℃以上，這個(gè)溫度可能組織里面的RNA水解酶和蛋白酶都能繼續(xù)發(fā)揮作用，導(dǎo)致樣本降解，取樣時(shí)可以將樣本放在干冰上面，干冰的溫度為-50℃左右。第二，剛?cè)〕鰜淼慕M織要盡快的使用PBS洗滌，將組織表面的血液，和脂肪去出干凈。然后馬上凍存。PBS對(duì)于最后的提取結(jié)果沒有影響。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末狀，且保證組織的溫度不會(huì)上升上去，時(shí)間沒有太多的要求，只有盡快。第四，只有5s，說明你的RNA嚴(yán)重降解了，原因就是前面的過程沒有處理好，例如取組織的時(shí)間太長(zhǎng)，研磨的時(shí)候沒有控制好溫度。------來自易基因的回答 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2021-09-05 15:36:49
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