 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 822 | 回復(fù): 2 | |||
XM沐沐新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
求助，TA克隆得到的克隆數(shù)太低 已有1人參與
|
| 設(shè)計(jì)了400bp的序列，進(jìn)行TA克隆，轉(zhuǎn)化DH5a感受臺(tái)態(tài)，500ul體系，才得到400左右克隆數(shù)，想要得到1000以上的克隆數(shù)，應(yīng)該怎樣優(yōu)化條件呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有185人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
日月兼程jxr
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 283.4
- 帖子: 33
- 在線: 9.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2426868
- 注冊(cè): 2013-04-19
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
XM沐沐: 金幣+50, ★★★很有幫助 2020-03-29 22:01:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
XM沐沐: 金幣+50, ★★★很有幫助 2020-03-29 22:01:02
| 不清楚你的具體操作。TA克隆涉及到：T-vector, 你的DNA片段（400 bp那個(gè)），DNA連接酶，2×Taq酶。首先你擴(kuò)增的DNA片段回收的濃度如何，保證濃度比較高，如果是用高保真的酶擴(kuò)增的，后面沒(méi)有堿基A，還需要用普通的2×Taq DNA聚合酶末端加A。T-vector理論上用量很少就可以產(chǎn)生大量的克隆，如果你想進(jìn)一步提高克隆量，可以適量加大T-vector的量。T-vector和DNA片段混合后加入DNA連接酶，連接體系直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。這個(gè)鏈接體系量很少，一般就10ul或者20ul。感受態(tài)我們一般自己做的是80ul-100ul，不知道你的500ul 指的感受態(tài)體積還是什么體積？沒(méi)有見(jiàn)過(guò)用這么大體積的感受態(tài)的。這里另外一個(gè)原因就是可能你的感受態(tài)效率不高。綜上，需要考慮的因素有：片段回收濃度如何，連接過(guò)程是否有問(wèn)題，感受態(tài)效果如何。 |
2樓2020-03-29 21:52:38
XM沐沐
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1337.2
- 散金: 30
- 帖子: 152
- 在線: 47.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4306960
- 注冊(cè): 2015-12-23
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
3樓2020-03-29 22:00:40
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 XM沐沐 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0307化學(xué)求調(diào)劑 +6 | 0ok0k 2026-03-07 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 2026調(diào)劑】考試A區(qū)0703化學(xué)類(lèi)323分 誠(chéng)求接收 +3 | 卷柏卷柏 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703求調(diào)劑 +4 | c297914 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿中石油，化學(xué)工程，301求調(diào)劑 +4 | 豚饅枳枳 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | wxz2 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 2026申博自薦 六級(jí)440電催化方向 +4 | 櫻落成影花成雙 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332材料求調(diào)劑 +6 | zjy101327 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | ws 上岸鴨 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +5 | Bananaiy 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291分，求調(diào)劑 +9 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-04 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學(xué)碩 +6 | 詞凝Y 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | 杰尼龜aaa 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 清華大學(xué) 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑。一志愿報(bào)考鄭州大學(xué)化學(xué)工藝學(xué)碩，總分295分 +8 | yl1 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +9 | 材紫有化 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)材料與化工325求調(diào)劑 +5 | 半截的詩(shī)0927 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|