 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 825 | 回復: 2 | |||
XM沐沐新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助，TA克隆得到的克隆數(shù)太低 已有1人參與
|
| 設計了400bp的序列，進行TA克隆，轉化DH5a感受臺態(tài)，500ul體系，才得到400左右克隆數(shù)，想要得到1000以上的克隆數(shù)，應該怎樣優(yōu)化條件呢？ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有68人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
日月兼程jxr
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 283.4
- 帖子: 33
- 在線: 9.9小時
- 蟲號: 2426868
- 注冊: 2013-04-19
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
XM沐沐: 金幣+50, ★★★很有幫助 2020-03-29 22:01:02
感謝參與，應助指數(shù) +1
XM沐沐: 金幣+50, ★★★很有幫助 2020-03-29 22:01:02
| 不清楚你的具體操作。TA克隆涉及到：T-vector, 你的DNA片段（400 bp那個），DNA連接酶，2×Taq酶。首先你擴增的DNA片段回收的濃度如何，保證濃度比較高，如果是用高保真的酶擴增的，后面沒有堿基A，還需要用普通的2×Taq DNA聚合酶末端加A。T-vector理論上用量很少就可以產(chǎn)生大量的克隆，如果你想進一步提高克隆量，可以適量加大T-vector的量。T-vector和DNA片段混合后加入DNA連接酶，連接體系直接轉化大腸桿菌。這個鏈接體系量很少，一般就10ul或者20ul。感受態(tài)我們一般自己做的是80ul-100ul，不知道你的500ul 指的感受態(tài)體積還是什么體積？沒有見過用這么大體積的感受態(tài)的。這里另外一個原因就是可能你的感受態(tài)效率不高。綜上，需要考慮的因素有：片段回收濃度如何，連接過程是否有問題，感受態(tài)效果如何。 |
2樓2020-03-29 21:52:38
XM沐沐
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1337.2
- 散金: 30
- 帖子: 152
- 在線: 47.9小時
- 蟲號: 4306960
- 注冊: 2015-12-23
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
3樓2020-03-29 22:00:40
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 XM沐沐 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[文學芳草園] 伙伴們，祝我生日快樂吧 +7 | myrtle 2026-03-10 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 282分材料專業(yè)求調劑院校 +17 | 楓橋ZL 2026-03-09 | 24/1200 |
|
|
|
[考研] 277求調劑 +3 | anchor17 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學一志愿211 總分320求調劑 +3 | 瑪卡巴卡啊哈 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334求調劑 +3 | mjqzz 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0857環(huán)境調劑 +5 | 熠熠_11 2026-03-10 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩，一志愿中國礦業(yè)大學，總分314，求調劑 +4 | 無懈可擊的巨人 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-08 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿湖師大化學289求調劑 +5 | XMCMM3.14159 2026-03-10 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科 +5 | li李樂成 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大化工（085600）調劑總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-09 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 2026博士申請 +6 | 起泡酒 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工284求調劑 +12 | 小黑想變白 2026-03-07 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調劑，數(shù)一英一274分 +4 | 小菲會努力 2026-03-08 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調劑 +3 | squirtle11 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817找調劑 +6 | kk扛 2026-03-08 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調劑（0703）一志愿東北大學 +5 | 好好- 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學290求調劑 +3 | 兩顆 西柚 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 不限學校專業(yè)的調劑同學看過來 +5 | 啊擺啊擺 2026-03-05 | 9/450 |
|