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| 查看: 2153 | 回復(fù): 10 | ||
mosaki銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR如何入門 已有3人參與
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大家好，小木蟲小白上來發(fā)帖，求助各位大神。 我是學(xué)中藥的，沒有生物基礎(chǔ)，最近因?yàn)榻拥巾?xiàng)目開始做植物DNA提取，PCR反應(yīng)和酶切再跑膠，跑出來的膠真是一塌糊涂，求問各位，有什么書/刊物/方法能夠自學(xué)提升PCR和跑膠水平？ |
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cry_2013
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
PCR這個說簡單也簡單，說復(fù)雜也挺復(fù)雜的，我沒有專門學(xué)過PCR相關(guān)知識，做的也就是普通PCR，遇到問題也是從網(wǎng)上查查相關(guān)原因（其實(shí)也沒遇到過太大的問題。。。。。。），不過入門的話我覺得你應(yīng)該先查一下PCR原理，知道PCR是什么，也就知道每一步的意義了，然后就是模板、引物設(shè)計(jì)、擴(kuò)增程序這一塊吧，模板這塊現(xiàn)在的試劑盒感覺都不太差，按說明書操作一般問題都不大的（制備模板樣本太刁難除外�。锏脑捑W(wǎng)上也有很多引物設(shè)計(jì)的方法和注意事項(xiàng)，我覺得模板質(zhì)量沒問題，引物只要二聚體，錯配什么的不要太過分（主要是3'端盡量不要有錯配），一般都沒問題的，擴(kuò)增程序這塊，你用的酶說明書上都有參考程序的，退火溫度我覺小范圍內(nèi)變化對擴(kuò)增結(jié)果影響不會太大，另外延伸的時間一定要夠啊，別說明書1000-2000bp/min就按2000走了，時間稍微寬裕點(diǎn)。另外跑膠不太好，如果是根本沒擴(kuò)出條帶就算了，如果marker都沒跑好，那肯定就是膠的問題了。我覺得PCR這個多做幾次，遇到問題解決問題，慢慢就有經(jīng)驗(yàn)了。不過樓主專門找PCR相關(guān)的書籍去學(xué)習(xí)挺好的，我也想過看書的，最終沒看下去 ，以上廢話挺多的，樓主覺得有用的就參考，覺得沒用的就隨便看看。。。 |
8樓2019-03-15 14:26:16
lizimu566
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2樓2019-03-13 16:11:19
 本帖僅樓主可見 |
3樓2019-03-13 18:46:56
mosaki
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4樓2019-03-13 19:36:49
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5樓2019-03-14 09:05:02
6樓2019-03-14 11:04:36
mosaki
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7樓2019-03-14 11:20:24
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我本科也是中藥的，碩士剛剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室沒人教做分子生物學(xué)也是一塌糊涂，馬上研三畢業(yè)，熬過去回過頭來看，這一行真的是門檻相當(dāng)?shù)偷牧恕Ｓ惺烊藥б粋�星期我覺得就夠了，多多請假會的人。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2020-03-18 13:53:16
匿名
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10樓2020-03-18 17:17:49
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