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當(dāng)Biacore 8K遇上92個(gè)臨床血清樣本
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上個(gè)月接了臨床合作項(xiàng)目，要用Biacore 8K篩一批92例的臨床血清樣本。原本想著高通量是這臺(tái)儀器的強(qiáng)項(xiàng)，真做起來才發(fā)現(xiàn)事情沒那么簡單。 樣本前處理就給了個(gè)下馬威。血清基質(zhì)干擾大，直接上機(jī)基線飄得沒法看。最后還是用蛋白A/G預(yù)處理，加上適當(dāng)稀釋才穩(wěn)住信號(hào)。但稀釋度一高，弱陽性樣本就容易漏檢，這個(gè)平衡點(diǎn)折騰了好幾天。 最頭疼的是樣品針攜帶污染。即便設(shè)了加強(qiáng)清洗程序，連續(xù)進(jìn)樣幾十例后，陰性對(duì)照的信號(hào)還是會(huì)有輕微上漂。后來在每10個(gè)樣本后插入一次空白再生，情況才好轉(zhuǎn)。Biacore 8K的8通道確實(shí)能并行檢測，但血清樣本的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)比純化蛋白大得多。 數(shù)據(jù)量也是個(gè)挑戰(zhàn)。92個(gè)樣本，每個(gè)樣本多循環(huán)檢測，一晚上跑出近千條傳感圖。雖然自帶軟件能批量處理，但篩選中的假陽性判斷還是得一條條曲線肉眼過。連續(xù)看了兩天曲線圖，眼睛都花了。 不過效率確實(shí)驚人。同樣的樣本量，用單通道儀器得跑一周，Biacore 8K兩個(gè)晚上就收工了。只是高通量篩選和精細(xì)動(dòng)力學(xué)分析終究是兩碼事，方法優(yōu)化上還有很多要摸索的地方。 想問問論壇里做過臨床樣本高通量篩選的老師，有沒有什么經(jīng)驗(yàn)可以分享？特別是基質(zhì)干擾和交叉污染的控制，有沒有更好的解決方案？ |
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