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當(dāng)Biacore 8K遇上92個臨床血清樣本
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上個月接了臨床合作項目,要用Biacore 8K篩一批92例的臨床血清樣本。原本想著高通量是這臺儀器的強項,真做起來才發(fā)現(xiàn)事情沒那么簡單。 樣本前處理就給了個下馬威。血清基質(zhì)干擾大,直接上機基線飄得沒法看。最后還是用蛋白A/G預(yù)處理,加上適當(dāng)稀釋才穩(wěn)住信號。但稀釋度一高,弱陽性樣本就容易漏檢,這個平衡點折騰了好幾天。 最頭疼的是樣品針攜帶污染。即便設(shè)了加強清洗程序,連續(xù)進樣幾十例后,陰性對照的信號還是會有輕微上漂。后來在每10個樣本后插入一次空白再生,情況才好轉(zhuǎn)。Biacore 8K的8通道確實能并行檢測,但血清樣本的交叉污染風(fēng)險比純化蛋白大得多。 數(shù)據(jù)量也是個挑戰(zhàn)。92個樣本,每個樣本多循環(huán)檢測,一晚上跑出近千條傳感圖。雖然自帶軟件能批量處理,但篩選中的假陽性判斷還是得一條條曲線肉眼過。連續(xù)看了兩天曲線圖,眼睛都花了。 不過效率確實驚人。同樣的樣本量,用單通道儀器得跑一周,Biacore 8K兩個晚上就收工了。只是高通量篩選和精細動力學(xué)分析終究是兩碼事,方法優(yōu)化上還有很多要摸索的地方。 想問問論壇里做過臨床樣本高通量篩選的老師,有沒有什么經(jīng)驗可以分享?特別是基質(zhì)干擾和交叉污染的控制,有沒有更好的解決方案? |
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