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基礎(chǔ)科研平臺(tái)新蟲 (小有名氣)
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RNA為啥是實(shí)驗(yàn)界“易碎王者”？稍不注意就報(bào)廢
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做分子實(shí)驗(yàn)的寶子誰沒被RNA虐過！提取半天結(jié)果降解、跑膠糊成一團(tuán)，明明步驟都對(duì)卻翻車不斷，其實(shí)根源就是它太“嬌弱”，先天+后天全是坑，今天把關(guān)鍵原因扒透 一、自身先天脆弱！單鏈結(jié)構(gòu)扛不住造 RNA和DNA差太多，DNA是雙鏈配對(duì)超穩(wěn)定，RNA卻只有一條單鏈，骨架本身就松散，一點(diǎn)外界刺激就斷鏈； 而且它自帶活性超強(qiáng)的羥基，哪怕常溫放一會(huì)兒，都會(huì)慢慢發(fā)生水解反應(yīng)，自然狀態(tài)下都在悄悄變質(zhì)，不像DNA能常溫放更久，天生就帶著“易碎體質(zhì)”； 對(duì)溫度、pH超敏感，凍融溫差大、緩沖液pH稍微跑偏，分分鐘就降解失效，比實(shí)驗(yàn)里的其他樣本難伺候10倍！ 二、天敵RNase防不勝防！藏哪兒都有還殺不死 RNA最大的敵人就是RNase（RNA酶），這玩意兒簡(jiǎn)直是“降解刺客”，躲都躲不開還難滅活： ? 分布超廣：手上的皮膚、說話濺的唾液、掉的頭發(fā)絲里全有，實(shí)驗(yàn)時(shí)徒手碰樣本、對(duì)著離心管說話，都可能帶進(jìn)去； ? 實(shí)驗(yàn)器材全是隱患：沒做無酶處理的槍頭、離心管，殘留的RNase根本清不干凈，哪怕是新的也可能有殘留；操作臺(tái)、移液槍表面也會(huì)附著，不提前擦除必翻車； ? 耐造到離譜：常規(guī)高壓滅菌（121℃）、反復(fù)凍融都?xì)⒉凰浪�，普通清洗完全沒用，微量一點(diǎn)就能快速降解大量RNA，真·防不勝防！ 三、實(shí)驗(yàn)踩坑點(diǎn)太多！這些細(xì)節(jié)全是降解誘因 很多時(shí)候翻車不是技術(shù)差，是細(xì)節(jié)沒注意，這些坑千萬別踩： ? 樣本處理太慢：組織/細(xì)胞離體后沒及時(shí)凍存、沒快速裂解，樣本里自帶的RNase會(huì)立刻激活，當(dāng)場(chǎng)就把RNA拆了； ? 器材沒做無酶處理：圖省事用普通槍頭/離心管，沒烤干、沒泡無酶水，RNase直接污染樣本； ? 反復(fù)凍融樣本：RNA凍融一次就傷一次，多次凍融后冰晶會(huì)破壞結(jié)構(gòu)，還會(huì)釋放殘留RNase，降解速度翻倍； ? 操作環(huán)境亂：實(shí)驗(yàn)臺(tái)沒提前用RNase抑制劑擦拭，旁邊有人說話、走動(dòng)帶起灰塵，都可能帶入雜質(zhì)引發(fā)降解； ? 試劑失效沒檢查：無酶水放太久、緩沖液污染，哪怕加了RNase抑制劑，試劑出問題也白搭！ 最后碎碎念? RNA提取想不翻車，核心就是控RNase+護(hù)結(jié)構(gòu)：樣本離體即凍存、全程無酶環(huán)境、少反復(fù)凍融、操作全程冰上做，避開這些坑才能穩(wěn)出好結(jié)果～ 有沒有寶子被RNA坑過？評(píng)論區(qū)說說你的翻車經(jīng)歷 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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