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基礎科研平臺新蟲 (小有名氣)
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[交流]
RNA為啥是實驗界“易碎王者”？稍不注意就報廢
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做分子實驗的寶子誰沒被RNA虐過！提取半天結果降解、跑膠糊成一團，明明步驟都對卻翻車不斷，其實根源就是它太“嬌弱”，先天+后天全是坑，今天把關鍵原因扒透 一、自身先天脆弱！單鏈結構扛不住造 RNA和DNA差太多，DNA是雙鏈配對超穩(wěn)定，RNA卻只有一條單鏈，骨架本身就松散，一點外界刺激就斷鏈； 而且它自帶活性超強的羥基，哪怕常溫放一會兒，都會慢慢發(fā)生水解反應，自然狀態(tài)下都在悄悄變質，不像DNA能常溫放更久，天生就帶著“易碎體質”； 對溫度、pH超敏感，凍融溫差大、緩沖液pH稍微跑偏，分分鐘就降解失效，比實驗里的其他樣本難伺候10倍！ 二、天敵RNase防不勝防！藏哪兒都有還殺不死 RNA最大的敵人就是RNase（RNA酶），這玩意兒簡直是“降解刺客”，躲都躲不開還難滅活： ? 分布超廣：手上的皮膚、說話濺的唾液、掉的頭發(fā)絲里全有，實驗時徒手碰樣本、對著離心管說話，都可能帶進去； ? 實驗器材全是隱患：沒做無酶處理的槍頭、離心管，殘留的RNase根本清不干凈，哪怕是新的也可能有殘留；操作臺、移液槍表面也會附著，不提前擦除必翻車； ? 耐造到離譜：常規(guī)高壓滅菌（121℃）、反復凍融都殺不死它，普通清洗完全沒用，微量一點就能快速降解大量RNA，真·防不勝防！ 三、實驗踩坑點太多！這些細節(jié)全是降解誘因 很多時候翻車不是技術差，是細節(jié)沒注意，這些坑千萬別踩： ? 樣本處理太慢：組織/細胞離體后沒及時凍存、沒快速裂解，樣本里自帶的RNase會立刻激活，當場就把RNA拆了； ? 器材沒做無酶處理：圖省事用普通槍頭/離心管，沒烤干、沒泡無酶水，RNase直接污染樣本； ? 反復凍融樣本：RNA凍融一次就傷一次，多次凍融后冰晶會破壞結構，還會釋放殘留RNase，降解速度翻倍； ? 操作環(huán)境亂：實驗臺沒提前用RNase抑制劑擦拭，旁邊有人說話、走動帶起灰塵，都可能帶入雜質引發(fā)降解； ? 試劑失效沒檢查：無酶水放太久、緩沖液污染，哪怕加了RNase抑制劑，試劑出問題也白搭！ 最后碎碎念? RNA提取想不翻車，核心就是控RNase+護結構：樣本離體即凍存、全程無酶環(huán)境、少反復凍融、操作全程冰上做，避開這些坑才能穩(wěn)出好結果～ 有沒有寶子被RNA坑過？評論區(qū)說說你的翻車經歷 發(fā)自小木蟲手機客戶端 |
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