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[求助]
慢病毒難以轉染CAF如何改進實驗方案
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半年前我用CRISPER質粒敲了CAF的目的基因，現(xiàn)在因為CAF老化需要重新構建穩(wěn)系，但同樣的protocol在新的CAF上不再起效了。用293t包出來的病毒液轉染腫瘤細胞能夠構出穩(wěn)系，但同樣滴度的病毒液處理同樣時間（24h），換成完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h，再加入合適的puro（4μg/ml）濃度會導致細胞全部死亡，之前的穩(wěn)系這個濃度完全沒問題。細胞轉染時的融合度大概70%左右（也和之前一樣）。 請問哪里能夠改進，已經(jīng)卡在這里兩個月了，真的很需要這個穩(wěn)系QAQ。 |
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