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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者wzd00147將贈(zèng)送您 15 個(gè)金幣 | ||
wzd00147新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
慢病毒難以轉(zhuǎn)染CAF如何改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方案
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半年前我用CRISPER質(zhì)粒敲了CAF的目的基因，現(xiàn)在因?yàn)镃AF老化需要重新構(gòu)建穩(wěn)系，但同樣的protocol在新的CAF上不再起效了。用293t包出來(lái)的病毒液轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞能夠構(gòu)出穩(wěn)系，但同樣滴度的病毒液處理同樣時(shí)間（24h），換成完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h，再加入合適的puro（4μg/ml）濃度會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞全部死亡，之前的穩(wěn)系這個(gè)濃度完全沒(méi)問(wèn)題。細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)的融合度大概70%左右（也和之前一樣）。 請(qǐng)問(wèn)哪里能夠改進(jìn)，已經(jīng)卡在這里兩個(gè)月了，真的很需要這個(gè)穩(wěn)系QAQ。 |
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