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畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞融合大揭秘！三種超實(shí)用方法大比拼
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細(xì)胞融合那些事兒，這可是實(shí)驗(yàn)室里的硬核操作，快拿小本本記好啦！ 化學(xué)誘導(dǎo)融合：簡(jiǎn)單又實(shí)惠 首先出場(chǎng)的是化學(xué)誘導(dǎo)融合，靠的是聚乙二醇（PEG）這個(gè)神奇的小家伙。它能悄悄改變細(xì)胞膜的表面張力和流動(dòng)性，讓細(xì)胞膜乖乖地融合在一起。操作起來超簡(jiǎn)單，成本也低得感人，簡(jiǎn)直就是實(shí)驗(yàn)室里的性價(jià)比之王！ 細(xì)胞培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長期，密度達(dá)到1 - 2 × 10^6 cells/mL就行啦。用胰蛋白酶輕輕一處理，細(xì)胞就懸浮起來，離心機(jī)轉(zhuǎn)一轉(zhuǎn)，細(xì)胞就收集好了。再用無血清培養(yǎng)基洗兩次，把殘留的血清和培養(yǎng)基成分都趕走。然后，選好合適的PEG濃度，通常是30% - 50%（w/v），40%用得最多。PEG作用1 - 3分鐘就足夠啦，時(shí)間太長細(xì)胞會(huì)受傷，太短又融合不好。操作完后，用無血清培養(yǎng)基一稀釋，離心收集，融合細(xì)胞就搞定了！不過，這種方法也有缺點(diǎn)，PEG可能會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性，融合后的細(xì)胞還得通過選擇性培養(yǎng)基篩選，有點(diǎn)麻煩。 電融合技術(shù)：高大上的新寵 接下來是電融合技術(shù)，這可是近年來的先進(jìn)技術(shù)。通過施加電場(chǎng)，細(xì)胞膜就會(huì)極化和穿孔，然后就融合啦。融合效率高，對(duì)細(xì)胞的損傷還小，寶子們是不是已經(jīng)迫不及待想試試?yán)玻?br /> 細(xì)胞還是得先培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長期，收集、洗滌后，用含有高濃度鈣離子和鎂離子的電融合緩沖液重懸。電融合儀的電場(chǎng)強(qiáng)度一般在1000 - 2000 V/cm，1500 V/cm最常用。脈沖寬度在1 - 100 μs，10 - 50 μs用得最多。把細(xì)胞懸液放進(jìn)電極杯，設(shè)置好參數(shù)，啟動(dòng)電融合儀，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，確保細(xì)胞膜極化和穿孔。電脈沖一完成，加入無血清培養(yǎng)基稀釋，離心收集，融合細(xì)胞就到手啦。不過，電融合儀價(jià)格貴，操作技術(shù)要求也高，可不是隨隨便便就能搞定的。 病毒介導(dǎo)融合：高效率但有風(fēng)險(xiǎn) 最后是病毒介導(dǎo)融合，靠的是病毒表面的融合蛋白。仙臺(tái)病毒和滅活的流感病毒是常用的病毒。先培養(yǎng)病毒，測(cè)定滴度，然后細(xì)胞準(zhǔn)備、洗滌、重懸，把病毒上清液加入細(xì)胞懸液，讓病毒滴度達(dá)到10^7 - 10^8 pfu/mL。37°C孵育30 - 60分鐘，讓病毒吸附到細(xì)胞表面�？刂坪貌《緷舛群透腥緯r(shí)間，感染完成后，稀釋病毒上清液，離心收集，融合細(xì)胞就能培養(yǎng)啦。這種方法融合效率高，適用于多種細(xì)胞類型，但生物安全風(fēng)險(xiǎn)大，操作復(fù)雜，病毒滴度測(cè)定也不容易。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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