 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 432 | 回復(fù): 0 | |||
畢合生物2024銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
細(xì)胞融合大揭秘！三種超實(shí)用方法大比拼
|
|
細(xì)胞融合那些事兒，這可是實(shí)驗(yàn)室里的硬核操作，快拿小本本記好啦！ 化學(xué)誘導(dǎo)融合：簡(jiǎn)單又實(shí)惠 首先出場(chǎng)的是化學(xué)誘導(dǎo)融合，靠的是聚乙二醇（PEG）這個(gè)神奇的小家伙。它能悄悄改變細(xì)胞膜的表面張力和流動(dòng)性，讓細(xì)胞膜乖乖地融合在一起。操作起來(lái)超簡(jiǎn)單，成本也低得感人，簡(jiǎn)直就是實(shí)驗(yàn)室里的性價(jià)比之王！ 細(xì)胞培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)到1 - 2 × 10^6 cells/mL就行啦。用胰蛋白酶輕輕一處理，細(xì)胞就懸浮起來(lái)，離心機(jī)轉(zhuǎn)一轉(zhuǎn)，細(xì)胞就收集好了。再用無(wú)血清培養(yǎng)基洗兩次，把殘留的血清和培養(yǎng)基成分都趕走。然后，選好合適的PEG濃度，通常是30% - 50%（w/v），40%用得最多。PEG作用1 - 3分鐘就足夠啦，時(shí)間太長(zhǎng)細(xì)胞會(huì)受傷，太短又融合不好。操作完后，用無(wú)血清培養(yǎng)基一稀釋，離心收集，融合細(xì)胞就搞定了！不過(guò)，這種方法也有缺點(diǎn)，PEG可能會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性，融合后的細(xì)胞還得通過(guò)選擇性培養(yǎng)基篩選，有點(diǎn)麻煩。 電融合技術(shù)：高大上的新寵 接下來(lái)是電融合技術(shù)，這可是近年來(lái)的先進(jìn)技術(shù)。通過(guò)施加電場(chǎng)，細(xì)胞膜就會(huì)極化和穿孔，然后就融合啦。融合效率高，對(duì)細(xì)胞的損傷還小，寶子們是不是已經(jīng)迫不及待想試試?yán)玻?br /> 細(xì)胞還是得先培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，收集、洗滌后，用含有高濃度鈣離子和鎂離子的電融合緩沖液重懸。電融合儀的電場(chǎng)強(qiáng)度一般在1000 - 2000 V/cm，1500 V/cm最常用。脈沖寬度在1 - 100 μs，10 - 50 μs用得最多。把細(xì)胞懸液放進(jìn)電極杯，設(shè)置好參數(shù)，啟動(dòng)電融合儀，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，確保細(xì)胞膜極化和穿孔。電脈沖一完成，加入無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋，離心收集，融合細(xì)胞就到手啦。不過(guò)，電融合儀價(jià)格貴，操作技術(shù)要求也高，可不是隨隨便便就能搞定的。 病毒介導(dǎo)融合：高效率但有風(fēng)險(xiǎn) 最后是病毒介導(dǎo)融合，靠的是病毒表面的融合蛋白。仙臺(tái)病毒和滅活的流感病毒是常用的病毒。先培養(yǎng)病毒，測(cè)定滴度，然后細(xì)胞準(zhǔn)備、洗滌、重懸，把病毒上清液加入細(xì)胞懸液，讓病毒滴度達(dá)到10^7 - 10^8 pfu/mL。37°C孵育30 - 60分鐘，讓病毒吸附到細(xì)胞表面。控制好病毒濃度和感染時(shí)間，感染完成后，稀釋病毒上清液，離心收集，融合細(xì)胞就能培養(yǎng)啦。這種方法融合效率高，適用于多種細(xì)胞類型，但生物安全風(fēng)險(xiǎn)大，操作復(fù)雜，病毒滴度測(cè)定也不容易。 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工，291，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿東北大學(xué)080500，英一數(shù)二343分求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
274環(huán)境工程求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
申博
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
283求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
328求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 畢合生物2024 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +6 | 啊歐歐歐 2026-03-03 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 304分材料專碩求調(diào)劑 +11 | qiuzhigril 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
[考研] 化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +9 | 土土小蟲 2026-03-03 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩274能調(diào)劑去哪里？ +3 | 22735 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩080500復(fù)試調(diào)劑294 +3 | 四葉zjz 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286 +6 | ksncj 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報(bào)考 +9 | pin8023 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 0703化學(xué)學(xué)碩 288分
+4
|
旅行中的紫葡萄 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工專碩調(diào)劑 +4 | 利好利好. 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085700資環(huán)求調(diào)劑，初始279，六級(jí)已過(guò)，英語(yǔ)能力強(qiáng) +3 | 085700資環(huán)調(diào)劑 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +10 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-02 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | wxz2 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑。一志愿報(bào)考鄭州大學(xué)化學(xué)工藝學(xué)碩，總分295分 +8 | yl1 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料工程274求調(diào)劑 +5 | Lilithan 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291 求調(diào)劑 +3 | 化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)調(diào)劑 +10 | 提神豆沙包 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|