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夏末～易科新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
大鼠肝缺血再灌注模型 已有1人參與
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大鼠肝缺血再灌注模型 選用純種SD雄性大鼠，體重范圍180-250g，以標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，自由飲水，環(huán)境控制于室溫20-26℃，每日光照12-14小時(shí)，術(shù)后單獨(dú)籠養(yǎng)。 分組情況：設(shè)立正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組及受試藥物組（含三個(gè)不同劑量亞組），每組均包含15只大鼠。 手術(shù)流程 ① 大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，背部墊高，腹部剃毛消毒，佩戴無(wú)菌手套，鋪展自制無(wú)菌開(kāi)孔紗布。自劍突至恥骨上1cm處，沿腹中線逐層切開(kāi)皮膚、肌肉及腹膜，進(jìn)入腹腔。 ② ②使用血管鉗控制出血，同時(shí)將上腹壁組織向外上牽引，充分顯露隔下及腹腔內(nèi)部。以無(wú)菌溫?zé)?.9%氯化鈉紗布包裹腸管并移至右下腹。輕柔分離肝周韌帶，包括鐮狀韌帶及左右三角韌帶，使肝左、中、右葉游離。 ③將肝臟向左上方牽拉，分離右下葉與后腹膜粘連，于十二指腸球部上緣識(shí)別并分離肝蒂（含膽總管、肝動(dòng)脈、門靜脈）。使用無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉中葉及左葉的門靜脈與肝動(dòng)脈，造成約70%肝臟缺血，避免腸系膜靜脈嚴(yán)重淤血。 期間將肝臟、胃、腸還納入腹，以溫?zé)嵘睇}水紗布覆蓋切口。30秒后，阻斷葉顏色明顯變白，確認(rèn)阻斷成功，隨即用止血鉗夾閉皮膚切口，臨時(shí)閉合腹腔，并將大鼠置于37℃恒溫加熱墊上保溫。 ④60分鐘后解除血管夾，進(jìn)入再灌注階段。觀察肝臟、胃腸逐漸恢復(fù)血色，由暗紅轉(zhuǎn)為鮮紅，表明再灌注成功；若復(fù)流受阻，則終止實(shí)驗(yàn)。 術(shù)后于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h時(shí)間點(diǎn)，麻醉大鼠并摘眼球采血。血液室溫靜置2小時(shí)后，于4℃條件下3000rpm離心10分鐘提取血清，存儲(chǔ)于-80℃冰箱。 采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、AST（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）水平。同時(shí)，統(tǒng)一切取肝左葉組織塊（1.5cm×1cm×0.2cm）作為病理或分子生物學(xué)研究樣本。 模型評(píng)估 1、于術(shù)后0h、3h、6h、12h、24h及72h時(shí)間點(diǎn)，分別測(cè)定大鼠血清中ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）與AST（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）的濃度。 2、統(tǒng)一切取肝左葉組織塊（1.5cm×1cm×0.2cm），置于4%多聚甲醛溶液中固定24小時(shí)后進(jìn)行脫水、包埋處理，隨后制作石蠟切片，并進(jìn)行HE染色與TUNEL染色，依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)對(duì)肝細(xì)胞壞死程度進(jìn)行評(píng)分： 0分：肝細(xì)胞無(wú)損傷； 1分：輕度損傷，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)空泡化，部分細(xì)胞核固縮； 2分：中度損傷，血竇擴(kuò)張，細(xì)胞質(zhì)廣泛空泡化，細(xì)胞界限模糊； 3分：中度至重度損傷，出現(xiàn)凝固性壞死，血竇顯著擴(kuò)張，紅細(xì)胞外滲至肝竇，嗜酸性粒細(xì)胞增多，中性粒細(xì)胞貼壁； 4分：嚴(yán)重壞死，肝臟結(jié)構(gòu)喪失，肝索瓦解，伴有出血及中性粒細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)。 3、肝臟損傷后，血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6及ICAM-1等細(xì)胞因子表達(dá)量顯著上升，可通過(guò)ELISA方法進(jìn)行定量檢測(cè)。 注意事項(xiàng) (1) 術(shù)前大鼠需禁食12小時(shí)，但可自由飲水，以減少胃腸道內(nèi)容物對(duì)手術(shù)的干擾。 (2) 腹部切口應(yīng)盡可能小，操作時(shí)利用鑷子輕輕拎起腹壁，以減少組織損傷；遇出血點(diǎn)應(yīng)立即以止血鉗精準(zhǔn)夾閉。 (3) 分離肝蒂時(shí)需格外謹(jǐn)慎，采用棉簽進(jìn)行鈍性分離，避免損傷導(dǎo)致出血及休克風(fēng)險(xiǎn)。 (4) 盡量減少對(duì)周圍組織的干擾，特別是避免損傷肝蒂下方的下腔靜脈，以防大出血引發(fā)休克乃至死亡。 (5) 夾閉肝蒂時(shí)需準(zhǔn)確迅速，一次性完成，以免因反復(fù)操作導(dǎo)致缺血預(yù)處理，影響模型構(gòu)建效果。 (6) 夾閉肝蒂后，需將肝臟及胃腸道輕柔還納至原位，并保持腹腔內(nèi)水分，用溫?zé)岬纳睇}水紗布覆蓋手術(shù)區(qū)域。 (7) 術(shù)中需持續(xù)監(jiān)測(cè)并維持大鼠體溫，將其置于恒溫毯上保暖，防止因寒戰(zhàn)引起的應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致生命體征波動(dòng)。 發(fā)自小木蟲(chóng)手機(jī)客戶端 |
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2樓2025-07-31 13:34:20
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