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夏末～易科新蟲 (小有名氣)
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石蠟切片HE染色實(shí)驗(yàn)流程
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石蠟切片HE染色全流程詳解 ?HE染色，即蘇木精-伊紅染色法，是病理切片中的常規(guī)染色方法。其原理在于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精色素的親和力不同，經(jīng)染色后細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈現(xiàn)藍(lán)色，而胞漿及其他成分則呈現(xiàn)深淺不同的紅色。 步驟如下： 固定：離體后的組織應(yīng)及時(shí)進(jìn)行固定，常用固定液有中性福爾馬林、4％多聚甲醛等。固定液與組織體積比最好為10：1，固定時(shí)長(zhǎng)一般為24-48小時(shí)。 脫水：利用梯度酒精對(duì)固定完全的組織進(jìn)行脫水，為包埋劑的浸入做準(zhǔn)備。具體操作包括75%酒精溶液30分鐘--85%酒精溶液60分鐘--95%酒精60分鐘--100%酒精I(xiàn) 60分鐘--100%酒精I(xiàn)I 60分鐘。 透明：二甲苯置換酒精，為包埋劑的浸入做第二步處理。具體操作包括二甲苯I 30分鐘--二甲苯II 30分鐘。 浸蠟：石蠟I 60分鐘--石蠟II 60分鐘--石蠟III 60分鐘。 包埋：將組織固定于包埋劑中，便于切片。目前大多有模具，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需進(jìn)行正確包埋。 切片：使用切片機(jī)對(duì)埋塊切片，一般厚度為3-4um。切片前，可提前將埋塊放入冰水中浸泡，避免組織切片出現(xiàn)裂痕。 染色： 脫蠟：二甲苯I 15分鐘--二甲苯II 15分鐘--100％酒精I(xiàn) 5分鐘--100％酒精I(xiàn)I 5分鐘--95%酒精5分鐘--75%酒精5分鐘----純水。 染色：蘇木素4分鐘--自來(lái)水沖洗--分化液分化3秒--自來(lái)水沖洗--返藍(lán)液顯藍(lán)1分鐘--自來(lái)水充分沖洗5~10分鐘--伊紅25秒~1分鐘。 脫水透明：80％乙醇40秒--95％乙醇1分鐘--無(wú)水乙醇I 5分鐘--無(wú)水乙醇II 5分鐘--二甲苯I 5分鐘--二甲苯II 10分鐘--二甲苯III 10分鐘。 封片：中性樹脂封片，待其自然晾干后即可置于顯微鏡下觀察拍照。 注意：片子不可在空氣中長(zhǎng)時(shí)間暴露，會(huì)有水分進(jìn)入，因此從二甲苯取出后應(yīng)迅速封片，不然將影響后續(xù)觀察拍照。 發(fā)自小木蟲手機(jī)客戶端 |
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