 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 821 | 回復(fù): 0 | |||
夏末～易科新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
細胞凋亡實驗
|
|
細胞凋亡實驗 細胞凋亡實驗 1?? 實驗原理：Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸（PS）有高度親和力。當(dāng)細胞發(fā)生凋亡時，膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（PS）外翻到膜表面，而與熒光染料FITC標(biāo)記的Annexin V結(jié)合，可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行檢測 由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性，而4,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽(4,6-Diamidino-2-Phenylindole,DAPI)可與雙鏈DNA特異性結(jié)合并產(chǎn)生強烈的熒光，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時期的細胞。 2??實驗步驟： 以下均為貼壁細胞步驟： 注意避光 使用六孔板鋪板，一般細胞數(shù)為1×10^5/孔（根據(jù)自身調(diào)整） 1.將培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基收集到離心管中（因為懸液中還有細胞） 2.4℃預(yù)冷的PBS洗一次，收集PBS到離心管中（PBS中有細胞） 3.用500ul無EDTA的胰酶消化（EDTA會影響Annexin V與PS結(jié)合），用離心管內(nèi)的培養(yǎng)基終止消化，收集至相應(yīng)離心管中 4.離心后去上清（800rpm , 3min），PBS清洗一次，轉(zhuǎn)移至2mlEP管（1.5ml容易戳到管底） 5.棄上清（可以殘留50 ul上清，避免倒走細胞），用100ul試劑盒中的Annexin V buffer（10x稀釋成1x）重懸，依次各加入2.5ul Annexin V和 DAPI染料，室溫避光孵育15-20min。除樣本管外，還需設(shè)置空白管、單染管。 后加DAPI染料，因其細胞毒性大，時間延長，PI染色會增加 空白管：陰性對照組細胞，不做任何藥物處理，不加DAPI和Annexin V 染料，目的用于調(diào)節(jié)電壓 單陽管：只加DAPI或者Annexin V 染料，目的在于調(diào)節(jié)補償 樣本管：依次加入DAPI和Annexin V 染料，在空白管和單陽管調(diào)節(jié)好電壓補償后，獲得所需流式數(shù)據(jù) 6.加入300-400 ul 的1x Annexin V buffer，混勻樣本，注意減少吹打，減少機械性損傷 7. 立即上機 3?? 呈現(xiàn)結(jié)果為正常細胞（Annexin V -/ PI -）、早期凋亡細胞（Annexin V +/PI -）、晚期凋亡和壞死細胞（Annexin V +/PI +），一般來說呈現(xiàn)Annexin V - / PI +的細胞為人為機械性損傷細胞 發(fā)自小木蟲手機客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
如何高效的測量腺病毒的粒徑和電位
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
關(guān)于SCI雜志發(fā)表掛名
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
藥理學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有135人回復(fù)
-
26在職申博—生物與醫(yī)藥—抗體/ADC藥物方向，江浙滬，有項目，可帶資。
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
288分求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
292藥學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有1人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 夏末～易科 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +11 | Faune 2026-03-06 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 337一志愿華南理工材料求調(diào)劑 +4 | mysdl 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | 一二LV 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西工大材料學(xué)，英一數(shù)二總分321分，求調(diào)劑。 +4 | zz05zz 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
[考研] 誠求調(diào)劑，323分 有專利/科研/實習(xí)經(jīng)歷 +6 | 橙子cyx 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +5 | Gale1314 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 倘若起風(fēng)了呢 2026-03-05 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工求調(diào)劑！ +5 | 化工考生111 2026-03-04 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +6 | vuzhdkfjkx 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化工282求調(diào)劑一志愿211 +5 | NA0912 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 22408-273求調(diào)劑-擔(dān)任3個項目的負責(zé)人-1篇國際期刊論文（一作）1篇核心期刊論文在投。 +3 | 沒想好取什么名 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩080500復(fù)試調(diào)劑294 +3 | 四葉zjz 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，學(xué)碩，物理化學(xué)， 333求調(diào)劑 +5 | 李魔女斗篷 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 320 +6 | 和樂瑤 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
 5+6
|
vida_a 2026-03-01 | 47/2350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 338求調(diào)劑 +5 | 18162027187 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +3 | 熊境喆 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | aaadim 2026-03-01 | 5/250 |
|