 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 931 | 回復: 0 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
zhiqiang2013新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
ELISA試驗中不容忽視的細節(jié)盤點(二)
|
||
|
洗板 固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術，需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，是極其關鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結果。 邊緣效應 使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應”，即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應” 顯色 顯色一定要控制時間,一般來說，顯色時間過短，結果偏低；顯色時間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。 比色 比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。 其次，單波長或雙波長比色選擇的問題。單波長比色即是通常的以對顯色具有最大吸收的波長如450nm或492nm進行比色測定；雙波長雙色則酶標儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應特異顯色的吸光度值為零，此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。最后酶標儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點。由于ELISA測定中單個空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在ELISA測定比色時，最好是使用雙波長比色。 上海酶聯(lián)生物溫馨提示：盡管ELISA測定操作步驟簡單，但有可能會影響測定結果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚，小伙伴們在做實驗時多多留意。 |
回復此樓» 猜你喜歡
中國林科院林化所（南京）2026年招收化學/材料/環(huán)境工程等背景碩士研究生3名
已經(jīng)有3人回復
-
306求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
0703化學 學碩 理工科均可 不區(qū)分研究方向 總分279求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
0856材料工程，初試313調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
化工專碩調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
已經(jīng)有44人回復
-
歡迎采礦、地質、巖土、計算機、人工智能等專業(yè)的同學報考
已經(jīng)有10人回復
-
298求調(diào)劑一志愿中海洋
已經(jīng)有3人回復
-
環(huán)境調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
0703化學306調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 zhiqiang2013 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[基金申請] 請問大家，研究風險與應對措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085700資環(huán)求調(diào)劑，初始279，六級已過，英語能力強 +3 | 085700資環(huán)調(diào)劑 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 江蘇省農(nóng)科院招調(diào)劑1名 +5 | Qwertyuop 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學，化學專業(yè)344分，求調(diào)劑 +6 | 邢xing1 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工專碩348，一志愿985求調(diào)劑 +8 | 弗格個 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料學碩318求調(diào)劑 +15 | February_Feb 2026-03-01 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程學碩288求助調(diào)劑 +5 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學0703求調(diào)劑 學碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281電子信息求調(diào)劑 +3 | jhtfeybgj 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | north， 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工，270求調(diào)劑 +11 | YXCT 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3 | 。，。，。，。i 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請] 面上模板改不了頁邊距吧？ +6 | ieewxg 2026-02-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請]
 本子寫完了，給DS兄弟看了，得了92分
+3
|
Doma 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 想申博！ 2026-02-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[碩博家園] 【博士招生】太原理工大學2026化工博士 +4 | N1ce_try 2026-02-24 | 8/400 |
|