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Abbkine亞科因新蟲 (初入文壇)
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Annexin V-AbFluor 647 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
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Annexin V-AbFluor 647 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 Annexin V - AbFluor 647 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是一種用于檢測細(xì)胞凋亡的工具,以下是其詳細(xì)介紹: 檢測原理 在正常細(xì)胞中,負(fù)性磷脂位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),而膜的外表面則被不帶電的磷脂(PS)所占據(jù)。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入凋亡狀態(tài)后,帶負(fù)電的 PS 從質(zhì)膜的內(nèi)葉向外葉運(yùn)輸,使 PS 暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。人抗凝血劑 Annexin V 是一種 35 - 36kDa 的 Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白,對 PS 具有高度親和力。Annexin V 標(biāo)記有熒光團(tuán) AbFluor™ 647,可通過與外葉 PS 結(jié)合識別凋亡細(xì)胞。碘化丙啶(PI)是一種熒光核染料,對活細(xì)胞和凋亡細(xì)胞不敏感,但可對死細(xì)胞進(jìn)行紅色熒光染色,與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合緊密。在試劑盒提供的結(jié)合緩沖液中用 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 染色細(xì)胞群后,早期凋亡細(xì)胞顯示細(xì)胞膜暗紅色熒光,死細(xì)胞顯示細(xì)胞核紅色熒光和細(xì)胞膜暗紅色熒光,活細(xì)胞幾乎沒有熒光。檢測可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行分析。 試劑盒組成 通常包含 Annexin V - AbFluor™ 647、PI、Annexin V 結(jié)合緩沖液(通常有 5× 濃縮液,使用時需稀釋成 1×)等試劑,還可能包括一些用于細(xì)胞洗滌的緩沖液等。 產(chǎn)品特點(diǎn) 熒光特性優(yōu)良:AbFluor™ 647 熒光染料具有良好的亮度和光穩(wěn)定性,其吸收光譜與普通激發(fā)光源的主要輸出波長相匹配,在較廣泛的 pH 范圍內(nèi)保持強(qiáng)熒光,且有良好的水溶性,儲存不易產(chǎn)生沉淀。 操作簡便:操作時間短,染色后不需要清洗離心步驟(流式細(xì)胞儀分析時),節(jié)省時間。 檢測方法多樣:可通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量分析,也可通過熒光顯微鏡進(jìn)行定性觀察,適用于不同實(shí)驗(yàn)需求。 區(qū)分不同細(xì)胞狀態(tài):能同時區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞,為研究細(xì)胞凋亡過程提供更全面的信息。 使用方法 流式細(xì)胞儀分析:先誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并設(shè)置對照培養(yǎng)物,然后收集細(xì)胞,用冰預(yù)冷的 PBS 洗滌,再用 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞,加入 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 后室溫避光孵育,孵育結(jié)束后加入緩沖液并在染色后 30 分鐘內(nèi)通過流式細(xì)胞儀分析,使用 650nm 和 535nm 激發(fā),665nm 和 617nm 附近測量熒光。 熒光顯微鏡分析:懸浮細(xì)胞的操作與流式細(xì)胞儀分析的前幾步類似,最后將細(xì)胞懸浮置于玻片上用蓋玻片蓋住,通過熒光顯微鏡分析;貼壁細(xì)胞則需先接種于爬片或腔室載玻片上培養(yǎng)并誘導(dǎo)凋亡,除去培養(yǎng)基并用 PBS 洗滌后,加入含 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 的工作液孵育,再用 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液洗滌,最后添加緩沖液或用抗熒光淬滅封片劑封片后在熒光顯微鏡下分析。 應(yīng)用領(lǐng)域 主要用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的基礎(chǔ)研究和藥物研發(fā)等領(lǐng)域,如研究細(xì)胞凋亡的機(jī)制、評估藥物對細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用、篩選具有抗凋亡或促凋亡活性的化合物等。 技術(shù)支持 亞科因(武漢)生物技術(shù)有限公司 Abbkine亞科因致力于細(xì)胞科研檢測及細(xì)胞治療領(lǐng)域關(guān)鍵生化檢測試劑盒的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售,成為全球細(xì)胞制藥領(lǐng)域創(chuàng)新的關(guān)鍵推動者。 |
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