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Abbkine亞科因新蟲 (初入文壇)
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Annexin V-AbFluor 647 細胞凋亡檢測試劑盒
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Annexin V-AbFluor 647 細胞凋亡檢測試劑盒 Annexin V - AbFluor 647 細胞凋亡檢測試劑盒是一種用于檢測細胞凋亡的工具，以下是其詳細介紹： 檢測原理 在正常細胞中，負性磷脂位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，而膜的外表面則被不帶電的磷脂（PS）所占據(jù)。當細胞進入凋亡狀態(tài)后，帶負電的 PS 從質(zhì)膜的內(nèi)葉向外葉運輸，使 PS 暴露在細胞外環(huán)境中。人抗凝血劑 Annexin V 是一種 35 - 36kDa 的 Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高度親和力。Annexin V 標記有熒光團 AbFluor™ 647，可通過與外葉 PS 結(jié)合識別凋亡細胞。碘化丙啶（PI）是一種熒光核染料，對活細胞和凋亡細胞不敏感，但可對死細胞進行紅色熒光染色，與細胞內(nèi)的核酸結(jié)合緊密。在試劑盒提供的結(jié)合緩沖液中用 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 染色細胞群后，早期凋亡細胞顯示細胞膜暗紅色熒光，死細胞顯示細胞核紅色熒光和細胞膜暗紅色熒光，活細胞幾乎沒有熒光。檢測可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行分析。 試劑盒組成 通常包含 Annexin V - AbFluor™ 647、PI、Annexin V 結(jié)合緩沖液（通常有 5× 濃縮液，使用時需稀釋成 1×）等試劑，還可能包括一些用于細胞洗滌的緩沖液等。 產(chǎn)品特點 熒光特性優(yōu)良：AbFluor™ 647 熒光染料具有良好的亮度和光穩(wěn)定性，其吸收光譜與普通激發(fā)光源的主要輸出波長相匹配，在較廣泛的 pH 范圍內(nèi)保持強熒光，且有良好的水溶性，儲存不易產(chǎn)生沉淀。 操作簡便：操作時間短，染色后不需要清洗離心步驟（流式細胞儀分析時），節(jié)省時間。 檢測方法多樣：可通過流式細胞儀進行定量分析，也可通過熒光顯微鏡進行定性觀察，適用于不同實驗需求。 區(qū)分不同細胞狀態(tài)：能同時區(qū)分活細胞、早期凋亡細胞和死細胞，為研究細胞凋亡過程提供更全面的信息。 使用方法 流式細胞儀分析：先誘導(dǎo)細胞凋亡并設(shè)置對照培養(yǎng)物，然后收集細胞，用冰預(yù)冷的 PBS 洗滌，再用 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液重懸細胞，加入 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 后室溫避光孵育，孵育結(jié)束后加入緩沖液并在染色后 30 分鐘內(nèi)通過流式細胞儀分析，使用 650nm 和 535nm 激發(fā)，665nm 和 617nm 附近測量熒光。 熒光顯微鏡分析：懸浮細胞的操作與流式細胞儀分析的前幾步類似，最后將細胞懸浮置于玻片上用蓋玻片蓋住，通過熒光顯微鏡分析；貼壁細胞則需先接種于爬片或腔室載玻片上培養(yǎng)并誘導(dǎo)凋亡，除去培養(yǎng)基并用 PBS 洗滌后，加入含 Annexin V - AbFluor™ 647 和 PI 的工作液孵育，再用 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液洗滌，最后添加緩沖液或用抗熒光淬滅封片劑封片后在熒光顯微鏡下分析。 應(yīng)用領(lǐng)域 主要用于細胞凋亡相關(guān)的基礎(chǔ)研究和藥物研發(fā)等領(lǐng)域，如研究細胞凋亡的機制、評估藥物對細胞凋亡的誘導(dǎo)作用、篩選具有抗凋亡或促凋亡活性的化合物等。 技術(shù)支持 亞科因（武漢）生物技術(shù)有限公司 Abbkine亞科因致力于細胞科研檢測及細胞治療領(lǐng)域關(guān)鍵生化檢測試劑盒的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售,成為全球細胞制藥領(lǐng)域創(chuàng)新的關(guān)鍵推動者。 |
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