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枯草芽孢桿菌異源表達胰蛋白酶酶活問題 已有1人參與
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大家好，想向大家請教一個問題。 鄙人的問題是這樣的： 我以枯草芽孢桿菌專用的質(zhì)粒pwb980為載體，構(gòu)建了用以表達鏈霉菌胰蛋白酶的重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化至枯草芽孢桿菌SCK6中，后續(xù)的轉(zhuǎn)化子測序鑒定結(jié)果顯示我的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功。緊接著我將該重組菌株擴培發(fā)酵產(chǎn)酶并測定酶活，結(jié)果顯示有酶活。但是我第二次接種相同的甘油管菌株發(fā)酵產(chǎn)酶，但是卻無酶活。不知道問題出在哪里。 我細細觀察了一下，發(fā)酵產(chǎn)酶時的培養(yǎng)液是偏白的，發(fā)酵不產(chǎn)酶時的培養(yǎng)液是偏黃綠色的，不知道為什么會有這種差異情況出現(xiàn)，按理說接種的是同一支甘油管菌里的原始菌株，且培養(yǎng)基配方是相同的。 后續(xù)我也使用載體的通用引物進行了PCR鑒定，結(jié)果顯示我的目的條帶存在，質(zhì)粒也未丟失。同時我也重新進行了質(zhì)粒的重組轉(zhuǎn)化，測序結(jié)果也正確，但是發(fā)酵產(chǎn)酶也依舊無酶活。但是我第一次轉(zhuǎn)化時的確顯示重組菌株產(chǎn)酶，且具有較高的酶活。 希望大佬們能指點一下迷津，鄙人感激不盡，金幣也奉上。 |
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3樓2024-12-05 11:23:33
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2樓2024-11-18 18:36:24
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