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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者秦風(fēng)拂面將贈送您 20 個金幣 | |||
秦風(fēng)拂面新蟲 (初入文壇)
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[求助]
枯草芽孢桿菌異源表達(dá)胰蛋白酶酶活問題 已有1人參與
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大家好，想向大家請教一個問題。 鄙人的問題是這樣的： 我以枯草芽孢桿菌專用的質(zhì)粒pwb980為載體，構(gòu)建了用以表達(dá)鏈霉菌胰蛋白酶的重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化至枯草芽孢桿菌SCK6中，后續(xù)的轉(zhuǎn)化子測序鑒定結(jié)果顯示我的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功。緊接著我將該重組菌株擴(kuò)培發(fā)酵產(chǎn)酶并測定酶活，結(jié)果顯示有酶活。但是我第二次接種相同的甘油管菌株發(fā)酵產(chǎn)酶，但是卻無酶活。不知道問題出在哪里。 我細(xì)細(xì)觀察了一下，發(fā)酵產(chǎn)酶時的培養(yǎng)液是偏白的，發(fā)酵不產(chǎn)酶時的培養(yǎng)液是偏黃綠色的，不知道為什么會有這種差異情況出現(xiàn)，按理說接種的是同一支甘油管菌里的原始菌株，且培養(yǎng)基配方是相同的。 后續(xù)我也使用載體的通用引物進(jìn)行了PCR鑒定，結(jié)果顯示我的目的條帶存在，質(zhì)粒也未丟失。同時我也重新進(jìn)行了質(zhì)粒的重組轉(zhuǎn)化，測序結(jié)果也正確，但是發(fā)酵產(chǎn)酶也依舊無酶活。但是我第一次轉(zhuǎn)化時的確顯示重組菌株產(chǎn)酶，且具有較高的酶活。 希望大佬們能指點一下迷津，鄙人感激不盡，金幣也奉上。 |
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那只能再發(fā)酵一次看看，枯草發(fā)酵溫度一般是在25度，需不需要誘導(dǎo)劑。偶爾會出現(xiàn)發(fā)酵沒有酶活的問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2024-11-18 18:36:24
wangqi1107
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3樓2024-12-05 11:23:33
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4樓2025-01-04 17:32:05
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