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天藍(lán)藍(lán)。新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
類過(guò)氧化物酶相關(guān)計(jì)算 已有1人參與
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類過(guò)氧化物酶相關(guān)計(jì)算 最近剛剛接觸類酶，有很多不懂的地方，跪求大佬指導(dǎo)幫助 制備了一個(gè)類酶材料，當(dāng)反應(yīng)體系組成為: 類酶(0.05 mg/mL, 15μL)+H2O2(1M,30μL)+TMB(0.225-1.8 mM,45μL)+HAc-Ac-(110 μL) 計(jì)算結(jié)果為： Km=24 mM Vmax=5.49×10-4； 相同的材料，當(dāng)反應(yīng)體系組成為： 類酶(0.05 mg/mL, 2μL)+H2O2(1M,4μL)+TMB(0.03-0.24 mM,6 μL)+HAc-Ac-(188 μL) 計(jì)算結(jié)果為： Km=0.66 mM Vmax=9.73×10-6。 不知道應(yīng)該怎么選擇材料濃度、過(guò)氧化氫濃度和TMB濃度范圍，測(cè)試的數(shù)據(jù)圖如下圖所示，跪求大佬點(diǎn)撥 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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5樓2024-09-12 11:14:30
天藍(lán)藍(lán)。
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 164.3
- 散金: 268
- 帖子: 180
- 在線: 18.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 5812874
- 注冊(cè): 2017-03-02
- 性別: MM
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
2樓2024-09-03 10:32:09
天藍(lán)藍(lán)。
新蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2024-09-03 10:33:16
【答案】應(yīng)助回帖
理論上，材料濃度變化不會(huì)影響Km，不同的材料濃度能帶來(lái)的只有Vmax變化且成正相關(guān)，而且還可以通過(guò)Kcat（Kcat=Vmax/【E】）當(dāng)然實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)因?yàn)楦鞣N各樣的原因?qū)е聺舛茸兓瘯r(shí)出現(xiàn)相差很大的Km。而且你這個(gè)屬于CAT，雙底物，應(yīng)該有固定H2O2濃度，變化不同TMB濃度，還要有固定TMB濃度，變化不同的H2O2濃度。兩種底物對(duì)應(yīng)的不同Km與Vmax。具體如何選擇測(cè)試體系這個(gè)一兩句說(shuō)不清楚 |
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天藍(lán)藍(lán)。4樓2024-09-12 11:09:01
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