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天藍(lán)藍(lán)。新蟲 (小有名氣)
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[求助]
類過氧化物酶相關(guān)計(jì)算 已有1人參與
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類過氧化物酶相關(guān)計(jì)算 最近剛剛接觸類酶，有很多不懂的地方，跪求大佬指導(dǎo)幫助 制備了一個(gè)類酶材料，當(dāng)反應(yīng)體系組成為: 類酶(0.05 mg/mL, 15μL)+H2O2(1M,30μL)+TMB(0.225-1.8 mM,45μL)+HAc-Ac-(110 μL) 計(jì)算結(jié)果為： Km=24 mM Vmax=5.49×10-4； 相同的材料，當(dāng)反應(yīng)體系組成為： 類酶(0.05 mg/mL, 2μL)+H2O2(1M,4μL)+TMB(0.03-0.24 mM,6 μL)+HAc-Ac-(188 μL) 計(jì)算結(jié)果為： Km=0.66 mM Vmax=9.73×10-6。 不知道應(yīng)該怎么選擇材料濃度、過氧化氫濃度和TMB濃度范圍，測試的數(shù)據(jù)圖如下圖所示，跪求大佬點(diǎn)撥 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2024-09-03 10:32:09
天藍(lán)藍(lán)。
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3樓2024-09-03 10:33:16
【答案】應(yīng)助回帖
理論上，材料濃度變化不會(huì)影響Km，不同的材料濃度能帶來的只有Vmax變化且成正相關(guān)，而且還可以通過Kcat（Kcat=Vmax/【E】）當(dāng)然實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)因?yàn)楦鞣N各樣的原因?qū)е聺舛茸兓瘯r(shí)出現(xiàn)相差很大的Km。而且你這個(gè)屬于CAT，雙底物，應(yīng)該有固定H2O2濃度，變化不同TMB濃度，還要有固定TMB濃度，變化不同的H2O2濃度。兩種底物對應(yīng)的不同Km與Vmax。具體如何選擇測試體系這個(gè)一兩句說不清楚 |
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天藍(lán)藍(lán)。4樓2024-09-12 11:09:01
5樓2024-09-12 11:14:30
天藍(lán)藍(lán)。
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6樓2024-10-10 17:32:15
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