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點亮模型第4期 | 手把手教你非酒精性脂肪性肝炎(NASH)動物模型構(gòu)建
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一、模型動物的選擇 常用的實驗動物有大鼠、小鼠、家兔等,其中大鼠和小鼠的應(yīng)用最為廣泛,大鼠以 Wistar 和 Sprague Dawley(SD)為代表;小鼠的品系則更加多樣,其中C57BL/6J 最常見。 二、模型構(gòu)建方法 NASH模型主要有膳食動物模型【高脂飲食(high-fat diet, HFD)模型、蛋氨酸和膽堿缺乏(methionine-choline deficient, MCD)飲食模型、高膽固醇和高膽酸鹽(high-cholesterol and high-cholate, HCh Ch)模型】、化學(xué)誘導(dǎo)模型【四氯化碳(CCl4)誘發(fā)模型、乙硫氨酸誘發(fā)模型、高糖高脂飲食+鏈脲佐菌素(STZ)誘發(fā)模型】、基因修飾動物模型(DB/DB小鼠和OB/OB小鼠、Foz/Foz小鼠、SREBP-1c轉(zhuǎn)基因小鼠)等。 下面將常用的NASH模型的建模方法進行總結(jié)梳理。 1、高脂飲食(HFD)模型高脂高果糖高膽固醇飲食,模擬人類疾病形成機制,周期較長。造模方法:大、小鼠使用D09100301(起酥油版本)或者D09100310(棕櫚油版本),動物不會很胖,造模周期14周左右,可用于NASH模型構(gòu)建。 2、蛋氨酸限制、膽堿缺乏飲食,成模周期短,肝炎、肝纖維化。造模方法:1)MCD(蛋氨酸、膽堿缺乏飲食),MRCD(蛋氨酸微量、膽堿缺乏飲食),造模周期4-8周,實驗動物狀態(tài)較差、逐漸消瘦,甚至死亡;2) HFMRCD(45%脂肪供能或60%脂肪供能基礎(chǔ),蛋氨酸微量、缺乏及膽堿缺乏飲食),造模周期4-6周,實驗動物可有效保持體重,生存周期也會延長。 3、四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)CCl4是最早采用的試驗性脂肪肝模型誘導(dǎo)劑,可單獨施用或配合高脂飲食來誘發(fā)脂肪肝或肝纖維化。四氯化碳(CCl4)具有肝毒性,進入機體后在肝內(nèi)產(chǎn)生活化氧自由基,過氧化作用增強,加快肝脂肪變性進程,損傷肝細(xì)胞,造成肝細(xì)胞變性壞死,引起細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積而成肝纖維化,其代謝產(chǎn)物還可以刺激肝臟Kupffer細(xì)胞,釋放促炎性細(xì)胞因子,進一步加重肝臟的損傷。這種方法造模時間較短(8周左右),形成率高。適用于肝纖維化的研究。但是發(fā)病機制、病程變化及組織學(xué)形態(tài)與人類脂肪肝存在較大差異,并且CCl4具有較強的毒性,易致動物死亡。 4、四環(huán)素誘導(dǎo)四環(huán)素屬于抗生素類藥物,具有肝毒性,可用于誘發(fā)動物脂肪肝。其主要通過干擾線粒體DNA復(fù)制或轉(zhuǎn)錄,抑制載脂蛋白合成并影響線粒體脂肪酸β-氧化,抑制肝臟極低密度脂蛋白的釋放,脂質(zhì)以脂滴形式聚于肝細(xì)胞內(nèi),繼而造成肝細(xì)胞脂肪變性。該模型造模時間短,費用低,藥物毒性較CCl4弱,脂肪變性顯著,適用于模擬某些環(huán)境因素所致的NAFLD研究,也具有CCl4類似的缺點。 |
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