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yabxxh木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于His標(biāo)簽蛋白不結(jié)合鎳柱的問題,有沒有有經(jīng)驗(yàn)的大神來指點(diǎn)一二,多謝
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最近做一個(gè)蛋白,N端就是M+6xHis+目的蛋白,結(jié)構(gòu)很簡(jiǎn)單。 表達(dá)量不錯(cuò),可溶表達(dá)也很好,但是遇到一個(gè)非常奇怪的問題,就是目的蛋白始終無法結(jié)合鎳柱,洗脫液中無法檢測(cè)到目的蛋白。電泳圖上可以看出,目的蛋白全部穿出,載體部分經(jīng)過測(cè)序,沒有問題。 所以,有沒有遇到過這個(gè)問題的同學(xué),來交流一下,后面都是怎么解決的。 目前打算前面增加His數(shù)量到8,10個(gè),或者在His后面加一個(gè)linker, 請(qǐng)各位不吝賜教。 |
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