 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 904 | 回復(fù): 0 | |||
科研實(shí)驗(yàn)_研實(shí)新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
干貨分享 | 活性氧ROS的流式檢測
|
|
活性氧（ROS）的流式檢測通常是通過使用熒光探針如DCFH-DA來監(jiān)測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的變化。以下是該檢測方法的一些關(guān)鍵步驟和原理： 0 1 選擇熒光探針 常用的熒光染料是DCFH-DA，它能夠進(jìn)入細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)被酯酶水解成DCFH。DCFH隨后可以被細(xì)胞內(nèi)的活性氧氧化，生成發(fā)熒光的DCF。 0 2 DCFH-DA 是一種用于檢測活性氧ROS的熒光探針，全稱為2,7-二氯熒光素二乙酸酯。其工作原理為：DCFH-DA本身沒有熒光，但可以自由穿過細(xì)胞膜，一旦進(jìn)入細(xì)胞，它會被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成DCFH，由于DCFH無法穿過細(xì)胞膜，因此熒光探針會在細(xì)胞內(nèi)積聚。細(xì)胞內(nèi)的ROS能夠氧化無熒光的DCFH，生成有熒光的DCF，且熒光強(qiáng)度與ROS水平成正比。通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡等設(shè)備，在最大激發(fā)波長480nm和最大發(fā)射波長525nm下檢測熒光信號。 0 3 步驟 裝載探針 對于刺激時間較短(通常為2小時以內(nèi))的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。 原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。通�；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ�(xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。 收集細(xì)胞后裝載探針：按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞。通�；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ�(xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。 說明：僅在陽性對照孔中加入Rosup作為陽性對照，其余孔不必加入Rosup。 檢測 對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。 參數(shù)設(shè)置 使用488nm激發(fā)波長，525nm發(fā)射波長，實(shí)時或逐時間點(diǎn)檢測刺激前后熒光的強(qiáng)弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測DCF。 0 4 流式方法檢測需客戶提供的資料 1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 2.刺激藥物 實(shí)驗(yàn)流程 細(xì)胞培養(yǎng)——加藥刺激——細(xì)胞標(biāo)記——流式上機(jī)檢測——結(jié)果分析 結(jié)果 1.流式原始數(shù)據(jù) 2.數(shù)據(jù)分析結(jié)果 3.實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括儀器，試劑及實(shí)驗(yàn)步驟 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
（081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿中科大材料與化工。353分能調(diào)劑到哪？
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
337一志愿華南理工0805材料求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
伙伴們，祝我生日快樂吧
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
讀博申請
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿江南大學(xué)085701環(huán)境工程專碩總分287求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 科研實(shí)驗(yàn)_研實(shí) 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[文學(xué)芳草園] 伙伴們，祝我生日快樂吧 +3 | myrtle 2026-03-10 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 考研材料與化工，求調(diào)劑 +7 | 戲精丹丹丹 2026-03-09 | 7/350 |
|
|
[考研] 282分材料專業(yè)求調(diào)劑院校 +16 | 楓橋ZL 2026-03-09 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 哈工大材料324求調(diào)劑 +6 | 閆旭東 2026-03-10 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | Vv呀！ 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向 +56 | lisimayy 2026-03-04 | 73/3650 |
|
|
|
[碩博家園] 木蟲好像不熱鬧了，是不是？ +4 | 偏振片 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 上班不著吉 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 2026級碩士研究生招生/調(diào)劑 +3 | 知足常樂的樂 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【求調(diào)劑】293分環(huán)境工程求調(diào)劑材料/化工，服從調(diào)劑，抗壓能力強(qiáng)！ +13 | xiiiia 2026-03-04 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | Yyt楊1 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，數(shù)一英一274分 +4 | 小菲會努力 2026-03-08 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求0856調(diào)劑 +5 | 小力氣珂珂 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿華中科大0702，數(shù)一英一，293 +4 | 小羅露一二 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 2026調(diào)劑】考試A區(qū)0703化學(xué)類323分 誠求接收 +3 | 卷柏卷柏 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
+6
|
程晴之 2026-03-06 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | Bahati 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 哈爾濱理工大學(xué)2026年研究生調(diào)劑，材料科學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院研究生調(diào)劑 +3 | xinliu866 2026-03-06 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +4 | L9370 2026-03-05 | 4/200 |
|