 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6067)
- >導(dǎo)師招生 (1296)
- >考研 (1169)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (773)
- >文獻(xiàn)求助 (377)
- >考博 (233)
- >休閑灌水 (185)
- >碩博家園 (130)
- >基金申請(qǐng) (85)
- >公派出國(guó) (65)
- >論文投稿 (65)
- >論文道賀祈福 (62)
- >招聘信息布告欄 (58)
- >教師之家 (54)
- >博后之家 (52)
- >SciFinder/Reaxys (39)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1116 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
熒光素酶互補(bǔ)（Luc）實(shí)驗(yàn)
|
|
【導(dǎo)入】基于熒光素酶（Luciferase）的發(fā)光原理，形成了雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)。該系統(tǒng)包括螢火蟲(chóng)熒光素酶（Firefly luciferase）和海參熒光素酶（Renilla luciferase）。兩者可與各自的底物發(fā)生氧化作用產(chǎn)生生物熒光，產(chǎn)生的熒光值即表示兩種酶的表達(dá)量多少。 Firefly luciferase和Renilla luciferase被稱(chēng)為報(bào)告基因，是因?yàn)樵诒磉_(dá)調(diào)控研究時(shí)，利用兩者表達(dá)產(chǎn)生的熒光比值可監(jiān)控微觀層面上的分子間相互作用。 具體做法：將靶基因的的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5'啟動(dòng)子區(qū)融合在Firefly luciferase基因的上游，把3‘-UTR區(qū)或IncRNA序列融合在Firefly luciferase基因的下游，以研究啟動(dòng)子的強(qiáng)弱和轉(zhuǎn)錄因子對(duì)啟動(dòng)子的作用，或miRNA對(duì)目的基因/IncRNA的調(diào)控作用。 該系統(tǒng)中引入Renilla luciferase基因的TK載體作為內(nèi)參，以消除細(xì)胞轉(zhuǎn)染等因素帶來(lái)的組間誤差。 其中l(wèi)uciferase來(lái)源于細(xì)菌、螢火蟲(chóng)和發(fā)光海洋生物等，可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞中直接表達(dá)，無(wú)需表達(dá)后修飾，直接具備完全酶活性。 與GFP不同之處在于luciferase的發(fā)光檢測(cè)不需要激發(fā)光激發(fā)，且發(fā)光穿透力更強(qiáng)，這使得Luc實(shí)驗(yàn)具備可定量、高靈敏度及背景低等特點(diǎn)。 【利用熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證植物蛋白互作】 基本原理 在驗(yàn)證植物蛋白互作時(shí)，熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn) (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高靈敏度、可定量化、操作簡(jiǎn)單高效被廣泛應(yīng)用于植物學(xué)和動(dòng)物學(xué)蛋白質(zhì)互作研究。 目前, 應(yīng)用最為廣泛的熒火素酶基因來(lái)源于北美螢火蟲(chóng) (firefly luciferase), 該基因編碼550個(gè)氨基酸組成的熒火素酶蛋白 (大小為62 kDa)。 實(shí)驗(yàn)中, 熒光素酶蛋白被切成 N端 和 C端 2個(gè)功能片段, 即 NLuc (2–416AA) 和 CLuc (398–550AA) 。 在一個(gè)實(shí)驗(yàn)體系中, 待檢測(cè)的2個(gè)目標(biāo)蛋白分別與NLuc和CLuc融合, 如果2個(gè)目標(biāo)蛋白相互作用, 則熒火素酶的NLuc和CLuc在空間上會(huì)足夠靠近并正確組裝, 從而發(fā)揮熒火素酶活性, 即分解底物產(chǎn)生熒光 。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 將含有融合蛋白的植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌 (Agrobacterium) 后注射煙草葉片。24–48小時(shí)后，加入反應(yīng)底物熒火素, 利用植物活體分子影像系統(tǒng) (CCD imaging system) 或luminometer來(lái)定性定量檢測(cè)熒光強(qiáng)度, 以判定目標(biāo)蛋白之間是否存在相互作用及互作的程度。 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫(kù)與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
一志愿華科071000生物學(xué) 338求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
308求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0856化工原理
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工085600調(diào)劑求老師收留
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
（081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Sh畢合生物 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 售SCI一區(qū)T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齊全,可+急 +3 | 7x4iz20zqa 2026-03-11 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工296分求調(diào)劑 +14 | 稻妻小編 2026-03-09 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 一志愿浙江大學(xué)0856材料與化工求調(diào)劑 +3 | yansheng@211 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩，一志愿中國(guó)礦業(yè)大學(xué)，總分314，求調(diào)劑 +4 | 無(wú)懈可擊的巨人 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +3 | Ffff03 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑材料專(zhuān)碩293 +6 | 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0817一志愿蘇州大學(xué)280復(fù)試調(diào)劑 +9 | kk扛 2026-03-07 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291，求調(diào)劑 +12 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-05 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 化工284求調(diào)劑 +12 | 小黑想變白 2026-03-07 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿南大化學(xué)339分求調(diào)劑，四六級(jí)已過(guò)，有比賽，有文章 +7 | Gallantzhou 2026-03-07 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 辛仁豆腐 2026-03-08 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +5 | 撲風(fēng)鈴的貓 2026-03-08 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 很老實(shí)人 2026-03-09 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿江南大學(xué)，食品科學(xué)與工程，總分，320 +3 | yyyyyukino 2026-03-07 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 083000環(huán)境科學(xué)與工程調(diào)劑 +5 | 加油呀fxy 2026-03-07 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | 浮云滿足 2026-03-07 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +8 | forgman95 2026-03-05 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，一志愿鄭州大學(xué)，280分求調(diào)劑 +7 | Wuqi725 2026-03-05 | 7/350 |
|