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長安某吖鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
用CRISPR技術(shù)進(jìn)行基因敲除后消除質(zhì)粒后基因回補(bǔ)了
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 各位師兄師姐，老師們，我最近在做基因敲除的時(shí)候，用的CRISPR技術(shù)，使用的是pJOE8999質(zhì)粒，菌株是蘇云金芽孢桿菌，在消除基因的時(shí)候，電轉(zhuǎn)進(jìn)入芽孢桿菌后送了一次測序，測序結(jié)果是敲除掉了，然后進(jìn)行無抗LB轉(zhuǎn)接三次消除質(zhì)粒后，所有點(diǎn)板的菌株都回補(bǔ)了敲除的那個基因，因?yàn)楸救艘矊@個也不太了解，（但是也不懂，還是去別人課題組學(xué)習(xí)的技術(shù)，對方實(shí)驗(yàn)室也無法給出答案，說沒有遇到過，也嘗試過解決這個問題，用T2系統(tǒng)敲除法也試過，但是也是在第二次單交換回補(bǔ)了，那就可能是同源交換發(fā)生在同一側(cè)，但是pJOE8999就不是這個原因）有沒有師兄師姐或者老師，能解答一下孩子的問題嘛 非常感謝 |
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燕燕吖吖
新蟲 (初入文壇)
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2樓2023-09-24 22:31:04
長安某吖
鐵蟲 (初入文壇)
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4樓2023-09-25 16:54:23
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