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長(zhǎng)安某吖鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用CRISPR技術(shù)進(jìn)行基因敲除后消除質(zhì)粒后基因回補(bǔ)了
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![]() 各位師兄師姐,老師們,我最近在做基因敲除的時(shí)候,用的CRISPR技術(shù),使用的是pJOE8999質(zhì)粒,菌株是蘇云金芽孢桿菌,在消除基因的時(shí)候,電轉(zhuǎn)進(jìn)入芽孢桿菌后送了一次測(cè)序,測(cè)序結(jié)果是敲除掉了,然后進(jìn)行無(wú)抗LB轉(zhuǎn)接三次消除質(zhì)粒后,所有點(diǎn)板的菌株都回補(bǔ)了敲除的那個(gè)基因,因?yàn)楸救艘矊?duì)這個(gè)也不太了解,(但是也不懂,還是去別人課題組學(xué)習(xí)的技術(shù),對(duì)方實(shí)驗(yàn)室也無(wú)法給出答案,說(shuō)沒(méi)有遇到過(guò),也嘗試過(guò)解決這個(gè)問(wèn)題,用T2系統(tǒng)敲除法也試過(guò),但是也是在第二次單交換回補(bǔ)了,那就可能是同源交換發(fā)生在同一側(cè),但是pJOE8999就不是這個(gè)原因)有沒(méi)有師兄師姐或者老師,能解答一下孩子的問(wèn)題嘛 非常感謝 |

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

新蟲(chóng) (初入文壇)
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您好,能否請(qǐng)教一下您的PJOE這個(gè)載體的sgRNA 怎么插入的?第一次做,如果你能幫忙指點(diǎn)一下那就太好啦嗚嗚,有償 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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